Isolamento baseado em SEC de vesículas extracelulares derivadas de microglia: uma técnica para isolar vesículas extracelulares de meios de cultura condicionados por microglia

As células microgliais liberam mediadores imunológicos na forma de vesículas extracelulares ou EVs, incluindo corpos apoptóticos maiores e vesículas microscópicas menores, em meios de crescimento in vitro.

Para isolar EVs, comece tomando meios condicionados por microglia. Este meio de cultura contém células microgliais junto com os EVs liberados. Centrifugue o meio para pellet as células.

Colete o sobrenadante contendo os EVs, detritos e agregados de proteínas em um novo tubo. Centrifugue novamente para remover detritos celulares e grandes corpos apoptóticos.

Transferir o sobrenadante para um tubo de ultracentrifugação. Centrifugue em alta velocidade.

Rejeitar o sobrenadante que contém o meio gasto e ressuspender o EV e o grânulo agregado de proteínas no tampão pretendido.

Concomitantemente, pegue uma coluna de cromatografia de exclusão de tamanho com um filtro apropriado em sua base.

Embale firmemente a coluna com uma matriz de filtragem de gel que consiste em esferas de gel esféricas que formam uma peneira porosa de tamanho de poro definido.

Carregue a suspensão de EV e agregado de proteína no topo da fase estacionária.

À medida que a suspensão passa pela coluna, EVs de tamanho m