Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:07 min. • April 30th, 2023
A imagem intravital por meio de janelas de imagem óptica facilita o rastreamento de alta resolução de células individuais para estudar seu comportamento no microambiente nativo de um animal vivo.
Para começar, pegue um camundongo anestesiado com o cérebro pré-injetado com células cancerígenas e com uma janela craniana implantada dentro de um anel de metal. As células cancerígenas expressam proteínas fluorescentes nucleares.
Posicione o mouse, com a face para cima, em uma caixa de imagem. O suporte magnético na caixa de imagem ajuda a proteger a janela craniana implantada.
Agora, transfira a caixa de imagem para dentro da câmara de imagem ambientalmente controlada de um microscópio invertido para analisar o comportamento das células cancerígenas no cérebro.
No modo multifotônico, defina o laser para um comprimento de onda adequado. Concentre-se na região do tumor para detectar a fluorescência das células cancerígenas.
Defina uma pilha z para cada posição para adquirir várias imagens intravitais de células cancerígenas em diferentes planos ópticos.
Esta etapa permite a captura de uma proporção significativa de células cancerígenas no microambiente tumoral sem afetar a resolução celular.
Posteriormente, adquira imagens de diferentes posições do tumor por um período prolongado.
Rastrear o caminho das células cancerígenas em diferentes planos ópticos ajuda a determinar a migração individual de células tumorais usando software adequado.
No momento experimental apropriado, coloque o mouse voltado para cima em uma caixa de imagem e defina a objetiva de água 25x para a posição z mais baixa. Adicione uma grande gota de água à objetiva e transfira a caixa de imagem para a câmara climática escura de 37 graus Celsius do microscópio.
Traga a objetiva para a lamínula da janela de imagem craniana até que a gota d'água toque a lamínula e, usando o modo de epifluorescência, observe o tumor através da ocular para colocar as células em foco.
Sintonize o laser no comprimento de onda correto e selecione o modo ao vivo. Depois de selecionar várias posições de interesse para a imagem, registre suas coordenadas no software. Defina uma pilha z para cada posição para adquirir o volume máximo de células tumorais sem comprometer a resolução da célula tumoral, com o tamanho do passo entre as imagens definido como 3 micrômetros.
Em seguida, adquira imagens do volume do tumor em diferentes posições a cada 20 minutos por 2 horas, adicionando água à objetiva antes de cada aquisição de imagem. Após a aquisição da última imagem, transfira o mouse para uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recuperação total.