Ensaio de atração de macrófagos transwell baseado em fluorescência: um método in vitro para estudar a interação tumor-macrófago por meio de quimiotaxia induzida por produtos químicos

Em resposta a certos atrativos químicos liberados por tumores sólidos, células imunes, como macrófagos associados a tumores ou TAMs, infiltram-se nos tumores sólidos. Posteriormente, esses TAMs facilitam a progressão do tumor.

Para estudar as interações entre TAMs e células tumorais in vitro, comece pegando uma placa multipoços com uma inserção membranosa. Este arranjo separa temporariamente o poço em dois compartimentos.

Em seguida, adicione uma suspensão de TAMs ao compartimento superior do transpoço.

Suplementar o compartimento inferior do poço trans com um meio condicionado enriquecido com atrativos químicos secretados pelas células tumorais.

Incube a placa pelo tempo desejado.

Durante a incubação, os moduladores químicos atraem TAMs. Isso leva ao movimento de TAMs para o compartimento inferior através da membrana de inserção porosa por meio de quimiotaxia induzida por produtos químicos.

Agora, remova a inserção do poço. Transfira o meio condicionado contendo a população migrante de TAM para uma placa adequada para medição fluorescente.

Trate as células com um tampão de lise contendo corante fluorescente. Este tampão lisa os macrófagos. Eventualmente, as moléculas de corante se