Ensaio de síntese de DNA: uma técnica para avaliar a síntese de DNA em células em proliferação usando incorporação de timidina tritiada radioativa
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 2:54 min. • April 30th, 2023
Comece pegando uma placa de vários poços contendo células aderentes.
Trate essas células com um meio contendo timidina tritiada - uma versão radioativa da timidina - e incuba.
Durante a incubação, as células que se replicam ativamente incorporam timidina radioativa. Esta timidina emparelha a adenosina oposta, gerando DNA radiomarcado em células em proliferação.
Remova a mídia gasta dos poços. Adicione um tampão de lise para lisar as células e liberar DNA na suspensão.
Prepare o conjunto do coletor de células colocando os tubos coletores do coletor sobre os poços da microplaca.
Aplique pressão de sucção para permitir a aspiração de DNA suspenso dos poços. Esse DNA se deposita no papel de filtro, formando manchas específicas.
Recorte os chads de papel de filtro com manchas de DNA. Transfira esses chads individualmente para frascos de cintilação.
Cubra o papel de filtro com um coquetel de cintilação. Coloque o frasco para injetáveis num contador de cintilação líquida.
Dentro do balcão, o DNA marcado emite energia por decaimento radioativo. Essa energia é absorvida pelos componentes do coquetel de cintilação. Eventualmente, os componentes do coquetel começam a transferir os pulsos, que
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