Extração de Vesículas Extracelulares: Uma Técnica para Isolar Vesículas Extracelulares de Amostras de Tecidos Inteiros Usando Centrifugação Diferencial

Em tecidos inteiros, vesículas extracelulares ou EVs são liberadas pelas células no fluido intersticial. Estes incluem corpos apoptóticos, microvesículas e exossomos. Os EVs desempenham um papel importante na manutenção da comunicação célula a célula.

Para extrair EVs, comece coletando uma amostra de tecido inteiro.

Trate o tecido com um tampão de dissociação apropriado. Os componentes do tampão de dissociação desintegram a matriz extracelular presente no tecido, eventualmente soltando as células.

Transfira a suspensão para um homogeneizador e rompa mecanicamente o tecido ainda mais para dissociá-lo e liberar as células.

Em seguida, centrifugue o homogeneizado em baixa velocidade para peletizar as células e fragmentos de tecido enquanto os EVs permanecem no sobrenadante.

Levar o sobrenadante para um tubo novo. Centrifugue em alta velocidade para peletizar a maioria dos corpos apoptóticos de tamanho maior, deixando os EVs de tamanho menor no sobrenadante.

Recolha o sobrenadante contendo EV em uma seringa. Filtre os componentes para remover quaisquer corpos apoptóticos restantes e coletar a população de EV de pequeno porte.

Centrifugar o filtrado para obter os EVs no pellet. Descarte