Isolamento de astrócitos: um método para obter preparação pura de astrócitos corticais de camundongos

A cultura in vitro de astrócitos ajuda a investigar o papel biológico dos astrócitos - as células cerebrais mais abundantes.

Comece com um cérebro de camundongo neonatal colocado sob um microscópio de dissecação.

Remova os bulbos olfatórios e o cerebelo.

Faça uma incisão na linha média entre os dois hemisférios para separar o córtex.

Remova as meninges para evitar a contaminação na cultura de astrócitos por fibroblastos e células meníngeas.

Transfira os hemisférios do córtex para um meio gelado e pique em pedaços pequenos.

Recolher as peças corticais num tubo contendo tripsina. A tripsina, uma enzima protease, digere as proteínas de adesão celular, facilitando a separação celular.

Centrifugue para pellet o tecido digerido.

Remova o sobrenadante e adicione um meio de astrócitos ao pellet. Pipete vigorosamente para liberar uma população de células mistas de astrócitos, micróglia e células precursoras de oligodendrócitos ou OPCs.

Semeie esta suspensão celular em um frasco de cultura de tecidos revestido de polilisina e incuba.

As células carregadas negativamente se ligam à polilisina carregada positivamente e crescem em toda a superfície para formar uma camada confluente.

Agite o fras