Geração de células-tronco neurais induzidas (iNSCs) a partir de células mononucleares do sangue periférico (PBMNCs): um procedimento baseado em vírus de Sendai para reprogramar PBMNCs em iNSCs

Para reprogramar células somáticas em células-tronco neurais induzidas ou iNSCs - células-tronco que possuem alta capacidade de auto-renovação e diferenciação, comece cultivando células mononucleares do sangue periférico em um meio livre de soro para expandir os eritroblastos.

Em seguida, pipete a suspensão eritroblástica para uma placa de cultura. Trate as células com o vírus Sendai recombinante ou SeV. Esses vírus codificam fatores de transcrição de reprogramação. Centrifugue para sedimentar as células e incubar.

Após a fusão do SeV com a membrana da célula hospedeira, o genoma do vírus sofre transcrição seguida de tradução no citoplasma. A expressão ectópica de fatores de transcrição desencadeia o processo de reprogramação celular sem integrar os genes ao genoma do hospedeiro.

Agora, centrifugue a cultura para remover os vírus. Ressuspender as células transduzidas num meio adequado, seguido de plaqueamento. Além disso, centrifugue para remover detritos celulares. Ressuspenda as células no meio iNSC.

Posteriormente, semeie as células em uma placa revestida de proteínas. As células se ligam ao revestimento de proteína na placa. Complemente as células aderidas com meio iNSC em dias