Ensaio de desafio de tumor repetitivo: um ensaio de cultura in vitro para avaliar células T do receptor de antígeno quimérico (CAR) para potencial de morte de tumor repetitivo

A imunoterapia contra o câncer emprega células T receptoras de antígeno quimérico ou células T CAR, células T geneticamente modificadas que expressam CAR específico, que se ligam às células tumorais causando a morte celular. Para avaliar o potencial de morte tumoral das células T CAR in vitro, comece com uma cultura esferóide de tumor cerebral. Tratar a cultura com uma solução enzimática adequada para obter uma suspensão unicelular. Centrifugue e ressuspenda o pellet celular em um meio adequado.

Pipete o volume desejado de células tumorais seguido por células T CAR em uma placa de vários poços. Em cultura, receptores específicos em células T CAR reconhecem e se ligam a antígenos específicos em células tumorais. Essa ligação ativa as células T CAR e libera citocinas, resultando na morte das células tumorais. A ativação também leva ao aumento da proliferação de células T CAR.

Substitua a mídia por um volume igual de células tumorais. Repita a adição de células em dias alternados. Após a exposição repetida ao antígeno, poucas células T CAR podem sofrer exaustão celular. Essas células exibem capacidades limitadas de produção e proliferação de citocinas com aumento da expressão do recep