Marcação fluorescente de células de glioma: um método de transfecção baseado em vetor lentiviral para obter células de glioma que expressam proteína fluorescente para imagens de tecidos profundos

A imagem do câncer cerebral in vivo envolve a injeção de células cancerígenas marcadas com fluorescência no cérebro do camundongo para observar o desenvolvimento do tumor. Para marcação fluorescente, incube células de glioma com partículas de lentivírus. O vetor lentiviral carrega o gene da proteína fluorescente infravermelha, iRFP.

O vírus se liga à superfície da célula do glioma e libera RNA na célula. As enzimas celulares convertem o RNA viral em DNA de fita dupla, que se integra ao genoma celular e permite a expressão de iRFP. Os máximos de excitação e emissão do iRFP estão dentro de uma região do infravermelho próximo, onde os tecidos têm absorbância e espalhamento mínimos. Isso permite imagens precisas de tecidos profundos.

Em seguida, remova o meio gasto e adicione tripsina. A tripsina, uma enzima protease, digere as proteínas de adesão, separando as células da superfície do frasco. Pipete repetidamente para separar as células individuais. Recolher a suspensão celular num tubo e centrifugar. Agora, adicione um buffer adequado para ressuspender o pellet.

Dispense a suspensão celular em tubos de citometria de fluxo e core as células com um corante fluorescente, DAPI. O DAPI co