Co-cultura de células de glioblastoma em neurônios padronizados: uma técnica para monitorar a migração de células de glioblastoma em neurônios do hipocampo de ratos in vitro

O glioblastoma possui células-tronco que migram ao longo dos tratos axonais dos neurônios mielinizados para invadir locais distantes no cérebro. Para recapitular a migração de células de glioblastoma ou GBM em neurônios in vitro, comece pegando uma lamínula de vidro.

Ative a lamínula por tratamento com plasma de oxigênio e prepare-a com um agente funcionalizante. Este tratamento suporta fácil acesso aos produtos químicos nas etapas subsequentes. Adicione a solução PEGilada à lamínula e incube. Esta solução reveste a lamínula, impedindo a adesão dos neurônios em locais aleatórios.

Dispense um polímero fotoiniciador na lamínula e monte-o na câmara de imagem. Coloque a câmara no palco de um microscópio de fluorescência. Uma vez dentro, a iluminação UV ativa as moléculas fotoiniciadoras localmente nas áreas designadas correspondentes aos micropadrões previstos.

As moléculas fotoiniciadoras ativadas clivam a camada PEG subjacente, gerando o padrão desejado. Agora, adicione a solução de laminina e incuba. A laminina - uma glicoproteína - é depositada em locais específicos onde a camada de PEG foi removida. Semeie o meio contendo neurônios do hipocampo de ratos na lamínula.

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