Isolamento e Cultura de Pericitos Cerebrais Primários: Um Procedimento para Isolar e Cultivar Pericitos de Capilares Cerebrais Bovinos Sem Contaminação de Células Endoteliais

No sistema nervoso central, os pericitos são células multifuncionais que envolvem as células endoteliais, que formam o revestimento celular interno dos capilares. Os pericitos ajudam a regular o fluxo sanguíneo e a manter a homeostase cerebral.

Para isolar pericitos, comece tomando capilares cerebrais bovinos congelados em um frasco. Após o descongelamento, transfira o conteúdo para um tubo contendo a mídia desejada. Centrifugue para peletar os capilares. Remova o sobrenadante contendo mídia de congelamento. Ressuspender o sedimento capilar em meio e semear a suspensão num balão revestido de proteínas da matriz extracelular.

Incubar para permitir que os capilares adiram ao revestimento do balão. Substitua a mídia por mídia contendo heparina. Em cultura, o revestimento proteico da matriz extracelular promove a migração dos pericitos para longe dos fragmentos capilares e prolifera, enquanto a heparina estimula a migração das células endoteliais.

Substitua a mídia gasta por mídia contendo heparina. Com o tempo, os pericitos projetam processos alongados que aderem fortemente ao frasco. Com espaço limitado no substrato, as células endoteliais proliferam e formam uma monocamada inibida p