Isolamento de capilares cerebrais do cérebro humano: um método otimizado para extrair capilares cerebrais do tecido cerebral humano

Os capilares cerebrais são um componente vital da barreira hematoencefálica - uma barreira semipermeável que permite o movimento seletivo de solutos entre o sangue e o cérebro. Para isolar os capilares cerebrais, comece com tecido cerebral humano fresco. Remova as meninges e corte a substância branca.

Pique o tecido cerebral em fragmentos menores. Transferir os fragmentos para um homogeneizador contendo um tampão adequado e homogeneizar. A homogeneização desintegra os tecidos, liberando capilares e detritos teciduais na solução.

Transferir o homogeneizado para um tubo novo e adicionar um volume óptimo de um meio de gradiente de densidade adequado. Centrifugue a solução para peletar os capilares. Muito ou pouco meio gradiente de densidade resulta em baixo rendimento capilar. Remova o sobrenadante.

Ressuspenda o pellet em albumina de soro bovino ou tampão suplementado com BSA. A BSA estabiliza as enzimas digestivas e mantém a integridade estrutural dos capilares. Em seguida, filtre a solução com um filtro apropriado para remover grandes vasos e detritos de tecido.

Em seguida, passe o filtrado por um filtro de malha menor. Este filtro retém os capilares cerebrais e permite a passagem