Zimografia de peptídeos fluorescentes: uma técnica modificada para detectar a atividade da protease usando substratos fluorogênicos em géis de zimograma

A zimografia é uma técnica eletroforética que envolve um substrato proteico copolimerizado com gel de poliacrilamida para detectar enzimas hidrolíticas e sua atividade. Para começar, dissolva as amostras em um tampão de zimografia contendo glicerol, dodecil sulfato de sódio ou SDS e azul de bromofenol.

O glicerol torna o tampão de amostra mais denso do que o tampão de corrida circundante do gel, permitindo fácil carregamento nas bolsas de gel. SDS - um detergente aniônico - desnatura as enzimas da amostra e as reveste com uma carga negativa. O azul de bromofenol - um corante de rastreamento - ajuda a monitorar o progresso da amostra no gel.

Carregue as amostras em gel de poliacrilamida embebido com substratos fluorogênicos para detectar a atividade da protease. Agora, conecte os eletrodos e comece a eletroforese. O campo elétrico gerado faz com que todas as enzimas ligadas ao SDS migrem através do gel em direção ao eletrodo carregado positivamente.

Após a conclusão da eletroforese, remova o gel e lave-o em um tampão de renaturação contendo detergente não iônico que desloca o SDS para permitir a renaturalização enzimática. Em seguida, incube o gel em um tampão de desenvolvimento con