JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 4:40 min • July 8th, 2025
A barreira hematoencefálica ou BBB consiste em células endoteliais estreitamente dispostas conectadas por meio de junções apertadas. Isso forma uma vedação compacta que restringe o movimento das moléculas ao cérebro. Para permear a BBB, prepare um camundongo anestesiado, prendendo-o na posição de bruços em uma unidade estereotáxica.
Em seguida, insira um cateter na veia da cauda e lave-o com uma solução anticoagulante para evitar a coagulação do sangue. Pegue uma suspensão de microbolhas - microesferas de gás encerradas dentro de uma camada lipídica. Injete as microbolhas na veia lateral da cauda. Essas microbolhas entram na corrente sanguínea, eventualmente atingindo o cérebro.
Posteriormente, identifique a localização do cérebro e aplique gel de ultrassom no ponto correspondente na cabeça para melhor condução das ondas. Implante um transdutor de ultrassom sobre a área designada na cabeça do mouse. Use o transdutor para aplicar ondas de ultrassom fortes e direcionadas.
Devido à pressão acústica das ondas de ultrassom, as microbolhas se expandem e se contraem rapidamente várias vezes. Essas oscilações causam sonopermeação - ruptura das junções endoteliais apertadas - gerando aberturas localizadas na BHE. Essas aberturas facilitam a entrega de microbolhas ao cérebro.
Por fim, injete a solução contendo corante por via intravascular. As moléculas de corante extravasam dos vasos através das aberturas transitórias na BHE. A presença de corante no cérebro do camundongo indica sonoporação bem-sucedida.
Para a administração de microbolhas para abertura da BHE, insira um cateter de veia caudal de calibre 26 a 30 e lave a veia com um pequeno volume de solução de heparina. Prenda o cateter com fita adesiva para evitar o descolamento. Se o cateterismo for bem-sucedido, encha o cateter com a solução de heparina para evitar a coagulação do sangue.
Coloque o animal na plataforma estereotáxica regulada por temperatura para evitar hipotermia. Fixe a cabeça do animal usando uma barra de mordida e barras de orelha e prenda a cauda e o cateter na plataforma. Fixe o corpo do mouse com uma alça.
Coloque a plataforma estereotáxica com o rato montado na modalidade de imagem e tire imagens do animal. Determine se o animal está colocado corretamente na plataforma. Marque a posição do animal usando os marcadores fiduciais multimodais em combinação com a tubulação de processamento de imagem de acordo com o ponto de foco do transdutor. Determine a área-alvo colocando um contorno do cérebro sobre a imagem de raios-X adquirida ou usando imagens BLI para determinar o centro do tumor.
Antes de posicionar o transdutor, proteja as narinas e a boca do animal com fita adesiva para evitar que o gel de ultrassom interfira na respiração. Aplique gel de ultrassom no topo da cabeça do mouse para uma condução sonora adequada. Registre a cavitação de microbolhas com o hidrofone de agulha, que é colocado nas proximidades diretas do osso occipital.
Com base nos valores de calibração, guie o transdutor para a posição correta acima do animal. Aplique configurações pré-configuradas a todos os dispositivos conectados para atingir a região do cérebro de interesse. Depois que o transdutor for colocado na posição correta, dissolva e ative as microbolhas conforme descrito pelo fabricante.
Antes da injeção de microbolhas, lave o cateter da veia caudal com solução salina para confirmar o acesso à veia caudal. Inicie a trajetória de insonicação e simultaneamente injete as microbolhas. Ao mesmo tempo, o hidrofone da agulha detectará e verificará a cavitação de microbolhas em tempo real. Se desejar, administre um agente de contraste intravascular ou medicamento após a sonoporação. Monitore o animal até um ponto de tempo predeterminado.