Entrega de genes baseada em eletroporação in utero: uma técnica para injetar DNA de plasmídeo em células cerebelares embrionárias de embriões murinos

0 visualizações • 5:19 min. • July 8th, 2025

Comece tomando um modelo de camundongo fêmea anestesiado grávida colocado em decúbito dorsal. Prepare o mouse removendo os pelos da região abdominal. Incise a pele e as camadas musculares subjacentes para expor os cornos uterinos - os locais que hospedam embriões viáveis.

Agora, puxe os chifres uterinos para fora da cavidade abdominal. Pegue um capilar de vidro de ponta afiada contendo a solução de DNA de plasmídeo desejada. Localize o cérebro do embrião e injete a solução de DNA plasmidial através da parede do útero no quarto ventrículo. Esta posição é anterior ao primórdio cerebelar - o local desejado para uma eventual entrega de DNA.

Após a injeção, retraia o capilar vazio. Em seguida, para eletroporação do embrião injetado com DNA, posicione os dois eletrodos sobre a parede uterina de modo que o eletrodo positivo cubra o primórdio cerebelar e o eletrodo negativo cubra a região ao redor das orelhas.

Aplique pulsos elétricos pela duração desejada. Esses pulsos tornam as células neuronais cerebelares permeáveis, permitindo que o DNA do plasmídeo entre nas células-alvo. Finalmente, coloque os cornos uterinos de volta dentro da cavidade abdominal em sua posição natural. Suturar os c

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Entrega de DNA Plasmidial