JoVE Encyclopedia of Experiments
Pesquisa sobre o Câncer
0 vistas • 5:11 min • July 8th, 2025
A invasão perineural é um fenômeno metastático raro em que as células cancerígenas metastatizam para longe do local de origem para invadir o espaço perineural dentro dos nervos. O microambiente nervoso fornece um ambiente adequado para o crescimento e proliferação do câncer.
Para simular a invasão perineural in vivo, prepare um camundongo anestesiado em decúbito ventral. Faça uma pequena incisão paralela abaixo do osso da coxa - fêmur. Separe os músculos da coxa para revelar o nervo ciático subjacente - o maior e mais facilmente acessível nervo do corpo.
O nervo ciático se origina na parte inferior da coluna e atravessa os músculos pélvicos até cada perna. Ele retransmite sinais para movimento coordenado dos membros inferiores. Em seguida, remova os músculos circundantes do nervo e puxe-o para fora usando uma espátula esterilizada para suporte de injeção.
Agora, pegue uma seringa cheia da suspensão de células cancerígenas e injete-a paralelamente no nervo. Uma protuberância visível no nervo confirma uma injeção bem-sucedida, enquanto qualquer vazamento ao redor do local da injeção indica uma tentativa fracassada. Resumidamente, permita que as células se estabilizem dentro do nervo.
Em seguida, retraia suavemente a agulha e reposicione os músculos. Posteriormente, suturar a incisão. Permita que o mouse se recupere. Eventualmente, as células cancerígenas começam a migrar do local da injeção para a medula espinhal, confirmando a invasão perineural.
No dia anterior à cirurgia, remova o pelo ao longo do comprimento do fêmur no lado dorsal de um camundongo C57BL / 6J macho ou fêmea de 8 semanas com um cortador cirúrgico ou um agente químico de depilação. No dia da cirurgia, desinfete o palco, anestesiar os camundongos com isoflurano a 2% em uma câmara de indução e aplicar pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento sob anestesia.
Injete a quantidade apropriada de analgésico por via subcutânea e transfira um camundongo para um cone nasal na área cirúrgica. O suporte térmico é fornecido durante todo o procedimento cirúrgico. Coloque o camundongo anestesiado em seu lado ventral e prenda suavemente cada membro com fita hipoalergênica para criar uma leve tensão no membro a ser injetado.
Limpe o local da injeção com cotonete de betadine e, em seguida, novamente com álcool a 70%. Repita esse processo mais duas vezes e certifique-se de que nenhum cabelo solto permaneça no campo cirúrgico. Como etapa final, aplique a solução de betadina na área cirúrgica. Depois de colocar luvas estéreis e colocar o campo estéril, use uma ferramenta estéril dedicada para aplicar a pinça do dedo do pé antes de fazer a incisão sob o campo.
Em seguida, use uma tesoura pequena e estéril para fazer uma incisão de 1 centímetro cerca de 2 milímetros abaixo e paralela ao fêmur. Retraia a pele com uma pinça lateralmente para expor os músculos por baixo. Separe os músculos glúteo máximo e bíceps femoral ao longo de um plano fascial e exponha o nervo ciático por baixo. Liberte o nervo dos músculos circundantes usando dissecção romba.
Retire 3 microlitros de células cancerígenas do pellet para uma seringa estéril de 10 microlitros. Coloque uma pequena espátula de metal embaixo do nervo no ponto de injeção para suporte. Ao visualizar com o microscópio de dissecação, mantenha a agulha paralela ao nervo e insira-a no nervo. Tenha cuidado para não perfurar a parte de trás do nervo.
Injete lentamente as células no nervo ao longo de 5 segundos. A formação de um bulbo na área de injeção indica uma boa injeção. Deixe a agulha no lugar por 3 segundos para minimizar o refluxo antes de removê-la suavemente. A injeção adequada das células cancerígenas no nervo ciático é fundamental. Se as células forem injetadas fora do nervo, a consistência da invasão será prejudicada. No entanto, com prática e experiência, isso é muito raro.
Após a injeção, retorne o nervo à sua posição original e cubra o nervo com os músculos sobrejacentes. Trate os camundongos com analgesia adequada e, em seguida, feche a pele com suturas de náilon 5-0. Coloque o camundongo sozinho em uma gaiola limpa para observação e forneça suporte térmico durante a recuperação até que ele recupere a consciência suficiente para manter a decúbito esternal.