Transplante ortotópico de longo prazo de células tumorais em embriões de peixe-zebra: um método eficiente para entregar células tumorais no quarto ventrículo de embriões de peixe-zebra para análise de longo prazo do comportamento das células tumorais

Durante o transplante ortotópico, células tumorais ou tecidos de um doador portador de tumor são transplantados para o tecido correspondente de um receptor da mesma espécie. Primeiro, prepare uma suspensão uniforme - em um tampão adequado - de células tumorais cerebrais marcadas com fluorescência colhidas de um peixe-zebra portador de tumor. Usando uma ponta de carregamento de gel fino, carregue esta suspensão celular em uma agulha de microinjeção.

Em seguida, prenda a agulha carregada no suporte de um micromanipulador. Posteriormente, transfira um embrião de peixe-zebra anestesiado para uma placa de injeção pré-fabricada. Para facilitar o acesso durante a microinjeção, posicione o embrião lateralmente para visualizar os ventrículos cerebrais - uma rede de cavidades cheias de líquido cefalorraquidiano dentro do cérebro.

Ajuste a ponta da agulha para injetar a suspensão de células tumorais no quarto ventrículo, a cavidade em forma de diamante do rombencéfalo do embrião. As células tumorais ocupam o espaço oco dentro do ventrículo. Retraia a agulha. Transfira o embrião para uma placa de cultura contendo solução salina. Observe o embrião sob um estereomicroscópio de fluorescência para