Entrega intranasal de células-tronco neurais terapêuticas (NSCs) em modelo murino: um procedimento para entrega direcionada a tumor de NSCs carregadas com vírus oncolítico em modelo de camundongo portador de tumor cerebral

Para começar, submeta uma cultura de células-tronco neurais ou NSCs a condições de baixo oxigênio. Esse pré-condicionamento facilita a proliferação aprimorada de NSC e as habilidades de direcionamento de tumores. Em seguida, colha os NSCs e trate com a concentração desejada de vírus oncolítico replicante condicionalmente. Incubar para carregar os vírus nas células.

Agora, centrifugue a cultura para remover vírus não ligados. Ressuspenda os NSCs carregados de vírus em um tampão adequado. Enquanto isso, posicione um camundongo com tumor cerebral anestesiado na posição supina para facilitar o acesso às narinas. Administre cuidadosamente os NSCs carregados de vírus em cada narina do camundongo, repetindo em intervalos curtos de tempo.

Permita que o mouse se recupere. Os NSCs administrados por via intranasal na cavidade nasal contornam a barreira hematoencefálica para entrar no cérebro. Dentro do cérebro, o vírus se replica dentro dessas células pré-condicionadas e migra para o local do tumor, protegendo-se do sistema imunológico. Com o tempo, as partículas virais liberadas dos NSCs interagem e se ligam a receptores específicos da superfície celular superexpressos nas células tumorais.

Após a internalização do vírus, esses vírus replicantes condicionais se replicam preferencialmente nas células tumorais e causam lise celular. As células tumorais lisadas liberam partículas virais, que infectam as células tumorais circundantes, levando a uma cascata de infecção e lise de células tumorais. A lise celular expõe os antígenos tumorais, ativando uma resposta imune contra as células tumorais.

Para carregar células-tronco neurais humanas com vírus oncolítico, infecte as células-tronco com 50 réplicas condicionais de partículas virais de adenovírus por célula de acordo com os protocolos padrão de transfecção de adenovírus por 2 horas em temperatura ambiente com batidas periódicas. Em seguida, lave as células três vezes com meio fresco para remover quaisquer partículas virais não ligadas e suspenda as células em solução salina estéril para administração intranasal.

Quando as células tiverem sido modificadas conforme experimentalmente apropriado, coloque os animais portadores de tumor anestesiados em decúbito dorsal em uma cortina limpa sobre uma almofada térmica e coloque um travesseiro acolchoado sob as cabeças para manter as narinas em um ângulo vertical. O material do travesseiro deve ser plástico com álcool ou toalhas de papel enroladas descartáveis para evitar a contaminação cruzada de animais.

Quando os camundongos estiverem em posição, use uma micropipeta para dispensar 2 microlitros da população experimental de células-tronco neurais humanas de interesse em cada narina do primeiro camundongo, confirmando visualmente a aspiração da gotícula antes de aplicar o próximo volume de células. Repita a entrega para cada mouse por vez. Em seguida, aguarde 5 minutos e aplique a próxima rodada de células. Quando todas as quatro rodadas de células tiverem sido administradas, coloque os animais em uma câmara de recuperação com monitoramento até a recuperação total.

• Neural Stem Cells (NSCs) - Preconditioned cells exposed to low oxygen for improved proliferation.
• Cell Washing Procedure - A method to remove unbound entities, in this context, virus.
• Stem Cell Flow Chart - A graphical representation to outline the stem cell procedures.
• Murine Stem Cell Virus - An oncolytic virus used in research for its tumor-targeting properties.
• Stem Cell Delivery - Process of injecting stem cells (here, into nostrils).

• Introduce NSCs - Neural stem cells enhanced for tumor-targeting (e.g., NSCs).
• Key Concepts - Overview of oncolytic virus utilization within NSCs (e.g., theory of stem cell delivery).
• Underlying Mechanisms - NSCs carry virus to brain tumors, leading to cell lysis (e.g., mechanisms of murine stem cell virus).
• Connect to Experiment - Experiment uses virus-loaded NSCs injected into mice nostrils, targets brain tumor.

• [Question 1] What are neural stem cells and how do they target tumors?
• [Question 2] How does the process of cell washing work?
• [Question 3] What role does the murine stem cell virus play in tumor destruction?

• Practical Applications - Invasive brain tumor treatments (e.g., using NSCs).
• Industry Impact - Potential benefits for cancer treatment sectors (e.g., healthcare).
• Societal Importance - Improved life quality of brain tumor patients (e.g., via better treatment options).
• Link to Scientific Advancements - A step forward in oncolytic virus research and NSC technology.