Indução de glioblastoma usando transposição mediada por SB: uma técnica para gerar um novo modelo de camundongo usando integração mediada por transposon do plasmídeo SB no cérebro de camundongo neonatal

Comece pegando um tubo contendo uma mistura de plasmídeos. A bela adormecida ou plasmídeo de transposon SB é projetado para transportar um elemento transponível que compreende um oncogene indutor de glioblastoma derivado de humanos imprensado entre duas sequências repetidas invertidas. Além disso, esta mistura contém um plasmídeo SB transposase que possui um elemento de expressão da enzima transposase.

Agora, adicione um reagente de transfecção adequado ao tubo. Aspire a mistura para injeção em uma seringa equipada com uma microagulha. Em seguida, prenda um filhote de camundongo anestesiado na posição de bruços em uma estrutura estereotáxica. Visualize a região da cabeça do filhote para localizar as suturas cranianas. Posicione a microagulha acima das suturas cranianas.

Injete a mistura no ventrículo lateral - uma cavidade dentro do parênquima cerebral. Posteriormente, a solução é dispersa no parênquima cerebral, onde as moléculas reagentes de transfecção facilitam a entrada de plasmídeos dentro das células. Uma vez dentro da célula, o plasmídeo da transposase expressa as moléculas da enzima transposase, que reconhecem as sequências repetidas invertidas e extirpam o elemento transp