Isolando vasos cerebrais de camundongos: um protocolo para isolar vasos intactos de amostras de cérebro murino
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:20 min. • July 8th, 2025
Os vasos cerebrais são cercados por uma camada de células endoteliais fortemente conectadas. Essas células têm uma membrana basal ao seu redor, juntamente com componentes celulares, como pericitos e astrócitos.
Para isolar os vasos cerebrais dos neurônios e células gliais circundantes, pegue um béquer contendo cérebro de camundongo submerso em um tampão de homogeneização. Pique em pedaços pequenos. Homogeneizar o tecido cerebral para dissociá-lo, liberando neurônios, células gliais e vasos cerebrais. Este tratamento também interrompe a bainha de mielina ao redor dos neurônios.
Transfira o homogeneizado para um tubo e centrifugue para peletizar os recipientes. Os componentes mais leves, como neurônios e células gliais, permanecem no sobrenadante, enquanto a mielina forma uma densa camada de interface ao redor do pellet.
Rejeitar o sobrenadante e ressuspender o sedimento do recipiente com a camada de mielina anexada num meio de gradiente de densidade adequado. Centrifugue para peletar os vasos e obtenha uma faixa de mielina rica em gordura flutuando no topo do sobrenadante. Remova a banda de mielina junto com o meio gasto e ressuspenda o pellet em um novo tampão.
Coe a preparação do
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos