Ensaio de fagocitose in vitro: um método baseado em imagens ao vivo para estudar a faragocitose sinaptossomal mediada por astrócitos em tempo real

Os sinaptossomos são frações neuronais isoladas ricas em vesículas sinápticas. Esses sinaptossomos são engolidos por astrócitos - uma população de células imunes no cérebro - por um processo conhecido como fagocitose.

Para estudar a fagocitose mediada por astrócitos in vitro, comece tomando uma placa de cultura contendo uma monocamada de astrócitos. Agora, adicione a suspensão de sinaptossomo conjugado com indicador de pH à placa. Este corante indicador tem a propriedade de fluorescer exclusivamente em pH baixo. Incube a placa pela duração desejada.

Durante a incubação, a fosfatidilserina ou PS presente na membrana externa do sinaptossomo permite que ela se ligue aos receptores PS correspondentes na membrana dos astrócitos. Isso facilita o assentamento dos sinaptossomos na base. Aspire a mídia gasta junto com os sinaptossomos não ligados da placa.

Em seguida, suplemente a placa com fatores promotores de fagocitose e incube. Em seguida, crie imagens da placa usando um microscópio de fluorescência. Ao se ligarem à superfície, os astrócitos engolfam os sinaptossomos, fazendo com que eles entrem nos fagossomos. Uma vez dentro dos fagossomos, o baixo pH faz com que as moléculas do coran