Eletroporação de célula única em culturas organotípicas de fatias cerebrais: uma técnica in vitro para entregar plasmídeos dentro de neurônios-alvo em fatias cerebrais do hipocampo

Comece a eletroporação pegando uma pipeta de vidro contendo a solução de plasmídeo desejada. Conecte-o a um suporte de micropipeta equipado com um eletrodo de fio de prata, garantindo que o eletrodo seja inserido na micropipeta. Pegue uma câmara de eletroporação contendo uma seção ultrafina do hipocampo submersa em líquido cefalorraquidiano artificial.

Mergulhe o eletrodo de aterramento no fluido presente na câmara para eletroporação subsequente. Abaixe a ponta da pipeta na câmara de eletroporação e registre a resistência da linha de base. Use um microscópio para posicionar a ponta da pipeta perto da célula-alvo. Uma vez que a pipeta está em contato com a membrana neuronal, sua resistência aumenta drasticamente.

Aplique pressão de ar positiva para criar uma pequena invaginação na membrana neuronal. Aplique rapidamente uma sucção suave para empurrar a membrana para cima, criando uma vedação solta entre a ponta da pipeta e a membrana. Repita esse processo mais algumas vezes para condicionar a membrana e evitar a lise celular.

Após o condicionamento, aplique uma forte sucção para formar uma vedação firme com uma membrana chamada vedação gigaohm. Use pulsos elétricos para formar poros