Isolamento do epitélio das papilas circunvaladas (CVP) do modelo de camundongo: um procedimento enzimático para separar o epitélio da CVP da língua do camundongo

A superfície dorsal da língua do camundongo é coberta por três tipos principais de saliências elevadas chamadas papilas, ou seja, papilas fungiformes, circunvaladas e filiformes. As papilas circunvaladas, ou CVP, compreendendo trincheiras epiteliais que abrigam as papilas gustativas, são sustentadas por uma camada de tecido conjuntivo - a lâmina própria.

Para isolar o epitélio da PVC, comece com um camundongo sacrificado em decúbito dorsal. Em seguida, faça uma incisão nas bochechas e disseque a faixa espessa de tecido - o frênulo lingual - para separar a língua do assoalho da cavidade oral. Transfira a língua excisada para um prato contendo tampão resfriado.

Em seguida, corte a parte anterior da língua. Injete cuidadosamente um coquetel de digestão contendo enzimas dispase e colagenase no espaço subepitelial da região CVP, entre o epitélio e os tecidos subjacentes. Retraia a agulha enquanto injeta a suspensão na região.

Incube a língua pelo tempo apropriado. As dispases e colagenases digerem as proteínas da matriz extracelular dentro do tecido conjuntivo, facilitando a separação do epitélio da PVC do tecido. Após a incubação, faça incisões no epitélio na região do CVP.

Separe suav