0 visualizações • 3:44 min. • July 8th, 2025
Para começar, coloque um camundongo anestesiado em decúbito dorsal em uma placa de dissecação. Faça uma incisão para acessar a cavidade torácica e expor o coração. Localize a aorta e seus ramos - a artéria carótida comum esquerda e a artéria braquiocefálica. Passe essas artérias para isolar o coração.
Mergulhe imediatamente o coração excisado em uma placa de Petri contendo uma solução tampão oxigenada rica em nutrientes. Concomitantemente, insira uma cânula no coração de forma que sua ponta atinja a aorta ascendente. Use uma sutura para ligar a cânula. Conecte a cânula a uma seringa contendo solução de perfusão oxigenada.
Injete a solução de perfusão no coração. Esta etapa permite que o sangue saia das artérias coronárias e se derrame das veias pulmonares. Em seguida, conecte o coração canulado ao aparelho de Langendorff. Use a bomba peristáltica para realizar a perfusão a uma taxa de fluxo constante.
Nessas condições, o tampão se perfunde no coração. Isso cria pressão de canulação que fecha as válvulas aórticas, fazendo com que o tampão se mova pelas artérias coronárias. Eventualmente, o tampão perfunde os músculos cardíacos de forma retrógrada e depois se espalha pelas veias pulmonares. Um coração perfundido com sucesso está agora pronto para outras aplicações a jusante.
Depois de sacrificar um camundongo C57BL/6 macho de 8 a 10 semanas de idade, use uma pinça de tecido para levantar a pele do xifóide. Em seguida, usando uma tesoura de tecido, faça uma pequena incisão lateral através da pele. Faça uma dissecção romba entre a pele e a fáscia. Estenda a incisão na pele em direção às axilas em forma de V em ambos os lados e continue a incisão através da caixa torácica.
Em seguida, usando uma pinça de tecido, prenda o esterno e desvie a caixa torácica para cima para expor totalmente o coração e os pulmões. Usando uma pinça curva, retire o pericárdio. Se a glândula timo cobrir os grandes vasos, use duas pinças curvas para rasgar a glândula timo em ambos os lados. Em seguida, puxe suavemente a base do coração em direção à cauda até que a aorta e suas artérias ramificadas sejam visíveis como um vaso sanguíneo em forma de Y.
Transeccione a aorta na artéria carótida comum esquerda. Em seguida, corte a artéria braquiocefálica. Extirpar o coração e mergulhá-lo imediatamente em uma placa de Petri contendo a solução de Tyrode para lavar e bombear o sangue residual. Em seguida, transfira o coração para outra placa de Petri contendo a solução 1.
Sob um estereomicroscópio, usando uma tesoura de íris fina, apare qualquer tecido excedente. Expulse as bolhas de ar da seringa. Em seguida, com o auxílio de duas pinças de amarração retas, realizar a canulação retrógrada da aorta, cuidando para que todo o processo de canulação seja realizado sob a superfície do líquido. Ajuste a profundidade da canulação de forma que a ponta da cânula fique na aorta ascendente, tomando cuidado para não penetrar nas válvulas aórticas.
Em seguida, com uma sutura pré-nó 3-0, ligar a aorta ao entalhe da cânula. Injete suavemente a solução 1 da seringa para eliminar o sangue residual. Em seguida, conecte o coração canulado ao aparelho de Langendorff, tomando cuidado para não introduzir bolhas de ar no coração. Depois de conectar o coração canulado ao aparelho de Langendorff, perfunda o coração com a solução 1 por aproximadamente 2 minutos.