Isolamento de células intersticiais da válvula de camundongo: um método enzimático para isolar e cultivar VICs da válvula aórtica de camundongo

A válvula aórtica do coração é uma estrutura de três folhetos composta pelas células intersticiais da válvula interna ou VICs distribuídas por toda a matriz extracelular densa e as células endoteliais da válvula sobrejacente ou VECs.

Para isolar VICs, primeiro, prepare um camundongo sacrificado em decúbito dorsal. Através da linha média abdominal e da incisão torácica, exponha o coração. Faça um pequeno corte entre o átrio esquerdo e o ventrículo, seguido de perfusão salina para drenar o sangue. Corte a aorta ascendente no nível do arco aórtico e colha o coração.

Faça o transecto e descarte os dois terços distais dos ventrículos antes de dissecar longitudinalmente a porção restante do coração para revelar os folhetos da válvula aórtica em forma de "U". Extirpar os folhetos e enxaguar com tampão refrigerado para remover o sangue.

Em seguida, trate os folhetos com solução de colagenase de baixa concentração e incube. Em baixas concentrações, a colagenase - uma enzima proteolítica - quebra apenas parcialmente a matriz extracelular, desalojando os VECs de superfície dos folhetos.

Centrifugue e substitua o sobrenadante contendo enzimas por tampão, transferindo o pellet ressuspenso para