0 visualizações • 2:53 min. • July 8th, 2025
Para isolar ovários de camundongos neonatais, comece com um filhote de camundongo neonatal sacrificado em decúbito dorsal em uma plataforma cirúrgica. Faça uma longa incisão cirúrgica na pele e na parede do corpo para expor a cavidade abdominal. Em seguida, desloque suavemente os intestinos para revelar os chifres uterinos subjacentes.
Os cornos uterinos são duas longas estruturas tubulares que convergem no colo do útero e se estendem da bexiga em direção aos rins. Identifique os ovários - pequenas glândulas ovais - localizadas logo abaixo dos rins na ponta dos cornos uterinos, conectados através dos ovidutos.
Agora, corte o local de fixação do ovário de cada corno uterino para liberar os ovários. Transferir imediatamente os ovários excisados para uma placa de cultura estéril contendo meios pré-aquecidos adequados para manter a viabilidade dos ovócitos no tecido. Coloque a placa de cultura no aquecido stage de um microscópio de dissecação.
Usando uma agulha, remova cuidadosamente a bursa ovariana, um saco de tecido conjuntivo ao redor do ovário e quaisquer restos do oviduto. Finalmente, transfira os ovários para uma placa de vários poços contendo meio. Os ovários isolados podem ser usados para processamento a jusante.
Comece transferindo 1 mililitro de meio de dissecação para cada placa de embrião de vidro estéril. Depois de abater os filhotes de 0 a 5 dias de idade pós-natal, segure a pele que cobre a parede abdominal com uma pinça fina e faça uma incisão na pele e na parede corporal. Abra esta grande incisão, expondo o abdômen. A bexiga geralmente é ingurgitada nesta fase e pode ser perfurada para facilitar a dissecção.
Usando uma pinça de relojoeiro, afaste as entranhas. Em seguida, de cada lado, siga os cornos uterinos da bexiga até o rim. O ovário é uma estrutura semelhante a uma nuvem localizada logo abaixo do rim, na parte superior do útero. Segure o ovário suavemente e, usando uma tesoura, corte-o do útero. Depois de dissecar os dois ovários, transfira-os para pratos cheios de meio de dissecção quente.
Use um microscópio de dissecção com platina aquecida a 37 graus Celsius para dissecar os ovários. Usando agulhas de insulina, apare o saco da bursa e qualquer excesso de material, incluindo a trompa de Falópio, até que apenas o ovário permaneça. Em seguida, transfira cada ovário para o poço de uma placa preparada usando uma pipeta curva.