JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 4:09 min • July 8th, 2025
Para começar, estabilize um camundongo anestesiado em uma unidade estereotáxica. Conecte uma sonda para monitorar a temperatura do mouse. Regule sua temperatura corporal usando uma almofada de aquecimento.
Em seguida, esterilize o local da cirurgia e faça uma incisão longitudinal para expor o crânio.
Raspe o periósteo subjacente - uma camada de tecido conjuntivo da superfície do crânio.
Identifique a sutura coronal e marque a posição de interesse a partir do bregma - o ponto de intersecção das suturas coronal e sagital.
Fixe uma fita com uma pequena abertura na região marcada para restringir a área exposta durante a iluminação do laser. Agora, injete o corante fotossensível desejado na cavidade peritoneal do mouse.
As moléculas de corante injetadas viajam pelo sistema circulatório e chegam ao cérebro.
Em seguida, posicione a fonte de laser apropriada acima da região marcada e ilumine a área pela duração desejada. Após a iluminação, o corante circulante é ativado e produz espécies de oxigênio altamente reativas. Estes atuam danificando as membranas das células endoteliais nos vasos sanguíneos na área iluminada.
O dano às células endoteliais promove ativação e agregação local de plaquetas e subsequente formação de trombos, interrompendo o fluxo sanguíneo cerebral local. Em seguida, reidratar o crânio com soro fisiológico. Feche a incisão cirúrgica e retorne o camundongo à sua gaiola.
A interrupção do fluxo sanguíneo cerebral danifica o tecido cerebral, levando à disfunção do cérebro no camundongo.
Meça o peso corporal do camundongo para ajustar a dose de Rosa Bengala a ser injetada. Defina a almofada de aquecimento controlada por feedback associada para manter a temperatura corporal do mouse. Uma vez que o mouse esteja completamente anestesiado e fixado na estrutura estereotáxica, insira suavemente a sonda retal para monitorar a temperatura corporal do mouse durante todo o procedimento cirúrgico. Aplique a pomada de dexpantenol em ambos os olhos e limpe a pele e o pelo ao redor com um agente desinfetante.
Use uma tesoura para fazer uma única incisão longitudinal de 2,0 a 2,5 centímetros e retraia para expor o crânio. Use algodão para remover suavemente o periósteo e localizar as suturas coronais. Use óculos de proteção ao ligar o laser de 561 nanômetros e marque o bregma +3 milímetros para a esquerda. Em seguida, desligue o laser e prenda o adesivo com um orifício de 4 milímetros de diâmetro nas coordenadas marcadas.
Injete o camundongo por via intraperitoneal com Rose Bengal. Coloque o feixe de laser a uma distância de 4 a 5 centímetros do crânio. Ligue o laser e ilumine o crânio por 20 minutos. Reidrate o crânio aplicando duas gotas de solução salina a 0,9%. Depois de suturar a ferida, coloque o camundongo em uma câmara de recuperação a 37 graus Celsius para se recuperar da anestesia. Após uma hora, coloque o mouse de volta na gaiola em uma sala com temperatura controlada.