JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 3:48 min • July 8th, 2025
Em um modelo de camundongo com diabetes insulino-dependente, as ilhotas pancreáticas são injetadas através da veia porta hepática para fins terapêuticos. As células beta dentro do aglomerado de ilhotas produzem insulina, um hormônio que regula os níveis de glicose no sangue.
A injeção intraportal é uma técnica simples e eficaz, mas o sangramento pós-operatório geralmente leva à morte do animal modelo. Para evitar essa complicação, prepare um camundongo anestesiado na posição supina. Depile a área abdominal e aplique uma solução desinfetante. Faça uma incisão para expor a cavidade peritoneal. Exteriorize os intestinos da cavidade peritoneal em uma gaze úmida para expor a veia porta inferior.
Pegue uma seringa de insulina pré-carregada com ilhotas. Insira a agulha diretamente paralela na veia porta, com o chanfro voltado para baixo. Retire um pouco de sangue em uma seringa para misturar as ilhotas e injete lentamente. Puxe e empurre o êmbolo várias vezes para infundir toda a suspensão da ilhota. Agora, coloque uma esponja de gelatina para cobrir o local da injeção.
A gelatina, uma matriz hemostática, absorve sangue e incha para formar um coágulo estável sobre o local da punção, interrompendo assim o sangramento. Em seguida, retorne o intestino para a cavidade peritoneal e suture a incisão. Retorne o mouse à gaiola inicial e monitore regularmente os sinais de recuperação.
Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo pedal, aplique pomada nos olhos para evitar o ressecamento. Raspe o abdômen do camundongo anestesiado para remover o pelo e desinfete a área cirúrgica com três lenços alternados de iodo a 2% e álcool a 75%.
Em seguida, faça uma incisão de 1 a 1,5 centímetro no abdômen e abra a cavidade peritoneal. Coloque um pedaço estéril de gaze ao redor da incisão e use uma pinça ou pontas de algodão para transferir suavemente o intestino para a gaze. Em seguida, cubra o intestino com um pedaço de gaze embebida em solução salina e exponha a veia porta.
Para interromper o sangramento induzido por transferência de ilhotas usando espuma de gel, segure a agulha com o chanfro voltado para baixo e posicione a ponta da agulha com a abertura paralela à parede da veia porta. Antes de inserir a agulha na veia porta, retraia o êmbolo para aspirar 20 a 50 microlitros de sangue para a seringa para misturar com as ilhotas antes de infundir as ilhotas na veia porta enquanto pressiona e retrai repetidamente o êmbolo.
Quando todas as ilhotas tiverem sido entregues, coloque um pedaço de espuma de gel de aproximadamente 0,5 x 0,5 centímetro sobre o local da injeção. Use uma ponta de algodão para pressionar a espuma de gel para baixo, enquanto remove a agulha da veia porta. Segure o gel no lugar por cerca de dois minutos, enrolando a espuma de gel para garantir que cubra a veia porta.
Assim que o sangramento parar, retorne suavemente o intestino à cavidade peritoneal na posição original e injete 500 microlitros de solução salina quente na cavidade abdominal. Use suturas para fechar as camadas muscular e cutânea. Em seguida, coloque o mouse em uma gaiola limpa em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recuperação completa da anestesia, administrando analgesia a cada 12 horas e calor por 48 horas.