Isolamento do nó sinoatrial do modelo de camundongo: um procedimento para colher o nó SA do coração murino

No coração, o nó sinoatrial ou nó SA contém células musculares especializadas que iniciam e propagam continuamente impulsos elétricos por todo o coração, definindo a frequência dos batimentos cardíacos.

Para isolar o nó SA, primeiro prepare um camundongo eutanasiado tratado com anticoagulante na posição supina. O tratamento anticoagulante ajuda a prevenir coágulos sanguíneos para um isolamento eficiente do tecido.

Em seguida, faça uma incisão transversal na pele seguida de cortar as paredes laterais da caixa torácica para acessar o conteúdo da cavidade torácica e expor o coração subjacente.

Hidrate o coração com tampão contendo anticoagulante. Remova os pulmões junto com a traqueia.

Corte os principais vasos sanguíneos para extirpar o coração da cavidade torácica. Transfira o coração excisado para um prato forrado de silicone e elastômero contendo tampão para manusear o órgão delicado.

Proteja o ápice do coração. Agora, localize a posição da veia cava inferior e superior dentro do átrio direito. Além disso, identifique a localização do nó SA dentro do remendo de tecido entre as veias cavas.

Remova o ápice para drenar o sangue do coração. Agora, separe os átrios dos ventrículos. Corte ao longo do septo interatrial para remover o átrio esquerdo. Coloque o átrio direito na horizontal e retire o tecido do nó SA dele.

Comece segurando a pele do camundongo sacrificado com um hemostático e use uma tesoura cirúrgica para fazer uma incisão transversal na pele, logo abaixo da parte inferior da caixa torácica, do arco costal esquerdo ao arco costal direito. Use uma tesoura cirúrgica para abrir o peritônio e separe cuidadosamente o fígado do diafragma, sem cortar o fígado, para evitar sangramento excessivo.

Incise o diafragma ao longo do tórax para expor a cavidade torácica. Use a tesoura cirúrgica para cortar as paredes laterais da caixa torácica, desde as bordas dos arcos costais até as clavículas, para expor o coração. Em seguida, use uma agulha de seringa de calibre 23 para prender a caixa torácica sobre o ombro.

Use uma pipeta de transferência para colocar a solução de Complete Tyrode heparinizada quente no coração para mantê-lo úmido. Segure os pulmões com pinças Graefe extra finas e corte a traqueia com uma tesoura cirúrgica para remover os pulmões. Para remover o coração, segure o ápice do coração com uma pinça Graefe extra fina e corte a aorta e a veia cava inferior com uma tesoura cirúrgica.

Transfira o coração para uma placa de Petri contendo um elastômero de silicone curado e use uma pipeta de transferência para banhar o coração com 2 a 3 mililitros de solução de Tyrode completo heparinizado quente. Prenda o ápice do coração ao prato com um pino de dissecação.

Segure a veia cava inferior com pinça de laminectomia Dumont #2. Insira uma agulha de seringa de calibre 22 através das veias cava inferior e superior para localizar sua posição no átrio direito, que também identifica a posição aproximada do nó sinoatrial.

Segure o apêndice atrial direito com uma pinça de laminectomia Dumont # 2 e coloque um pino de dissecção no apêndice atrial direito para mantê-lo no lugar. Repita o mesmo procedimento para o apêndice atrial esquerdo. Em seguida, remova a agulha da seringa que atravessa a veia cava.

Use uma tesoura Castroviejo para remover o ápice do coração, fazendo uma incisão transversal nos ventrículos ou liberando o sangue do coração. Em seguida, lave o coração adicionando a solução de Tyrode completa heparinizada quente. Use uma tesoura Castroviejo para cortar ao longo do septo atrioventricular até que os átrios sejam separados dos ventrículos e mantenha a incisão mais próxima do ventrículo.

Corte ao longo do septo interatrial para remover o átrio esquerdo. Coloque os pinos de dissecção na periferia do átrio direito para que fique plano. Remova qualquer gordura, vasos ou tecido remanescente do átrio usando a tesoura Castroviejo e localize o nó sinoatrial no átrio direito.