Colheita de ovário intacto de camundongo: um procedimento cirúrgico para isolar o ovário completo do modelo murino

Comece com um camundongo fêmea anestesiado em uma posição lateral direita em uma plataforma cirúrgica. Em seguida, raspe o abdômen do mouse e esterilize a área. Faça uma incisão na pele paralombar e disseque os músculos abdominais para expor a cavidade abdominal.

Agora, localize uma das almofadas de gordura ovariana - o tecido adiposo ao redor dos ovários. Os ovidutos conectam os ovários a longas estruturas tubulares chamadas cornos uterinos. Além disso, exteriorize suavemente o ovário junto com a almofada de gordura ovariana, colocando-a em uma gaze úmida para manter o tecido hidratado.

Agora, identifique a bursa ovariana - a fina membrana que encapsula o ovário e a extremidade do oviduto. Incise a bursa oposta ao hilo ovariano, que forma a fronteira entre o ovário e o ligamento ovariano. O ligamento ovariano conecta estruturalmente o ovário ao corno uterino.

Depois de expor o ovário, remova-o suavemente da bursa ovariana e prenda o hilo ovariano para extirpar o ovário. Transfira o ovário excisado para uma placa de cultura contendo solução salina gelada.

Armazene o ovário de camundongo intacto composto de unidades funcionais - os folículos ovarianos, cada um contendo um oócito, até o uso posterior.

Antes de iniciar o procedimento, confirme o nível adequado de sedação beliscando os dedos dos pés e aplique pomada nos olhos do animal. Coloque o mouse em decúbito dorsal sobre uma pilha de toalhas de papel aquecidas e, começando logo abaixo das costelas e movendo-se distalmente, use uma máquina de cortar cabelo de lâmina número 40 para remover um quadrado de 2 a 3 centímetros de cabelo alguns milímetros lateralmente à linha média de cada lado do animal, com uma tira de cabelo de 1 a 2 2 centímetros cobrindo a linha média.

Após a administração da analgesia, transfira o animal para um campo cirúrgico estéril aquecido em decúbito dorsal e use um pedaço de gaze embebida em etanol a 70% de 2 por 2 centímetros seguido de um esfoliante betadine para desinfetar a área cirúrgica. Em seguida, faça uma incisão paralombar de 1 a 1,5 centímetro em uma das áreas cirúrgicas e duas tesouras para dissecar a pele da fáscia subjacente.

Em seguida, faça outra incisão através da fáscia e disseque lateralmente sob a fáscia o mais superficialmente possível até que a cavidade abdominal seja alcançada. Coloque uma cortina cirúrgica de gaze de 2 por 2 centímetros sobre a incisão e molhe a gaze com solução salina estéril.

Usando uma pequena pinça, localize o tecido adiposo que envolve o ovário e extraia suavemente a almofada de gordura e o ovário sobre a cortina. A almofada de gordura ovariana parecerá mais branca do que o tecido adiposo circundante. Coloque uma pinça de Bulldog de 1,5 polegada na almofada de gordura, tomando cuidado para não obstruir a bursa ovariana, para manter o trato no lugar durante o procedimento.

Use um microscópio de dissecação para identificar a bursa ovariana. Em seguida, segure a bursa com duas pinças de relojoeiro e faça uma incisão na bursa do lado oposto do hilo ovariano para expor o ovário.

Antes de decidir onde abrir a bursa, tente visualizar uma bolsa na bursa onde você colocará o novo ovário antes da sutura. Abra a bursa apenas o necessário para remover o ovário endógeno.

Remova suavemente o ovário da bursa e prenda o hilo ovariano com uma pinça de relojoeiro para extirpar o ovário e evitar sangramento. Em seguida, coloque o ovário da doadora em um vidro de relógio contendo solução salina estéril a 4 graus Celsius e coloque uma tampa solta sobre o vidro.