Instalação de montagem de anel craniano em modelo de camundongo: um procedimento cirúrgico para implantar a montagem da janela de visualização no crânio murino para imagens de medula óssea do crânio de alta resolução

Para a implantação do anel craniano no crânio do camundongo, primeiro, prepare um camundongo anestesiado na posição prona. Em seguida, faça uma incisão vertical na linha média para expor a calvária – a parte superior do crânio que protege a cavidade craniana que envolve o cérebro.

Agora, remova cuidadosamente o periósteo subjacente - uma camada densa de tecido conjuntivo vascular - e quaisquer detritos de tecido para obter uma imagem ideal. Limpe a superfície exposta do crânio com solução salina.

Em seguida, aplique cola de cianoacrilato no anel de metal do crânio. Monte-o sobre a área desejada do crânio exposto seco.

Segure o anel no lugar para permitir que ele se prenda firmemente ao crânio. Mantenha a superfície do crânio hidratada com solução salina. Prenda o anel na área do crânio com cimento dental para evitar qualquer vazamento durante a imagem subsequente.

Encha o anel com solução salina, que atua como meio de imersão para microscopia de alta resolução.

Transfira o mouse com anel de caveira para uma placa de suporte afixada no suporte do bloco. A cabeça do rato é levantada para evitar o desprendimento do anel do crânio.

Fixe o anel no suporte do bloco para imobilizar a cabeça do mouse e evitar artefatos de movimento induzidos pela respiração durante a imagem. Posicione o suporte e o conjunto do mouse para imagens intravitais através do osso do crânio, o que facilita a visualização de células especializadas e seu ambiente nativo em tempo real na medula óssea subjacente.

Desinfete o couro cabeludo com etanol 70% com uma toalha de papel enquanto remove os cabelos soltos. Use tesouras finas estéreis e pinças para fazer uma incisão em forma de T na linha média até 1 centímetro entre as orelhas no couro cabeludo para expor a calvária.

Exponha o crânio com uma pinça. Em seguida, use uma tesoura e uma pinça para remover cuidadosamente o periósteo. Use um cotonete estéril embebido em solução salina fisiológica para remover todo o periósteo e quaisquer detritos ou cabelos que possam alterar a imagem. Enxágue o crânio com solução salina para remover quaisquer vestígios de sangue e seque rapidamente o osso com um cotonete.

Aplique o gel de cola no anel. Coloque o anel no osso exposto e mantenha-o por alguns segundos para permitir que o anel se prenda firmemente ao crânio. Umedeça levemente o crânio com um cotonete umedecido com solução salina.

Prepare a pasta dental de silicone misturando cuidadosamente os componentes azul e amarelo na proporção de 1 para 1. Sele o anel aplicando a pasta dental para evitar vazamentos durante a imagem. Remova cuidadosamente qualquer pasta ou cola dental que possa ter entrado no anel. Em seguida, encha o anel com solução salina para verificar o vazamento.

Coloque o mouse no suporte e coloque uma compressa dobrada sob a cabeça do animal para levantar a cabeça e evitar o desprendimento do anel do crânio quando preso ao suporte. Aparafuse o anel no suporte do bloco. Coloque o suporte e o conjunto do mouse na câmara do microscópio aquecida.