JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 2:45 min • July 8th, 2025
O olho murino é coberto por três camadas: a esclera fibrosa mais externa, o revestimento coróide médio e a retina mais interna. A cavidade em forma de taça entre a retina e o cristalino do olho contém humor vítreo - um meio gelatinoso que ajuda a transmitir luz para a retina. Por sua vez, a retina passa a informação visual resultante através do nervo óptico para o cérebro.
Para extrair o copo da retina, pegue um camundongo sacrificado e enuclee seu olho. Mergulhe o olho em uma placa de Petri contendo um tampão gelado apropriado para evitar a degradação do tecido. Coloque a placa de Petri sob um microscópio de dissecação.
Corte os restos do nervo óptico da base do globo ocular. Faça uma pequena incisão na junção da retina e da córnea - uma cobertura transparente ao redor da lente do olho. Usando esta abertura, faça um corte circular completo ao longo da junção retina-córnea para separar a lente e o gel de humor vítreo do olho.
Remova o cristalino e o humor vítreo para obter uma ocular semicircular contendo a retina revestida por coróide e esclera. Crie vários cortes superficiais em toda a porção escleral da ocular. Use esses cortes para separar as camadas externas do olho para obter uma ventosa retiniana intacta para aplicações a jusante.
Enuclee os olhos de um camundongo adulto sacrificado e coloque-os em PBS gelado em uma placa de Petri e, em seguida, coloque a placa de Petri sob um microscópio de dissecação. Usando uma microtesoura, corte o nervo óptico e, em seguida, remova cuidadosamente os músculos retos extras presos fora do globo ocular.
Usando uma agulha de calibre 30, faça um furo na borda da córnea. Em seguida, use uma microtesoura de dissecção fina para fazer um corte circular ao longo da borda da córnea. Usando uma pinça de dissecção afiada, remova a córnea, o cristalino e o humor vítreo da ocular. Faça vários pequenos cortes na camada escleral na borda da ocular usando uma microtesoura de dissecção fina. Use duas pinças de dissecção afiadas para segurar o tecido escleral de cada lado e puxe a camada escleral com muito cuidado para removê-la da retina neural. Repita isso ao redor da ocular até que toda a esclera seja removida e uma concha retiniana intacta seja obtida.