0 visualizações • 4:19 min. • July 8th, 2025
Para começar, prenda um camundongo sacrificado na posição supina. Incisar lateralmente através da parede torácica para acessar a cavidade torácica e expor o coração. Extirpar o átrio direito e injetar solução salina no ventrículo esquerdo para drenar o sangue do coração.
Corte as conexões vasculares cortando os principais vasos sanguíneos. Além disso, faça uma incisão na artéria pulmonar a uma distância adequada da junção ventrículo-arterial, que serve como conduto para a pressurização. Remova os ventrículos para expor o lado ventricular à pressão atmosférica.
Agora, prenda um tubo de pressurização na artéria pulmonar, garantindo uma folga adequada entre a junção ventrículo-arterial e a extremidade do tubo para permitir que os folhetos da válvula se movam durante a pressurização.
À tubulação, conecte o reservatório cheio de solução salina fixado a uma altura calculada em relação à válvula pulmonar com base na pressão hidrostática desejada a ser aplicada ao lado arterial da válvula. O fluxo unidirecional do lado arterial com a pressão hidrostática aplicada resulta no fechamento dos folhetos valvares e distensão do tronco pulmonar.
Em seguida, introduza um fixador adequado no reservatório e continue a perfusão. O fixador perfundido estabiliza a morfologia celular e a arquitetura do tecido.
Coloque uma gaze embebida em fixador sobre o tecido para fixar o tecido ao redor da válvula e evitar o ressecamento. Guarde a válvula cardíaca fixa no fixador até o uso.
Comece autoclavando as ferramentas necessárias para a dissecção do mouse, incluindo tesouras finas, microfórceps, pinças microvasculares, pinças de aplicação de pinças, porta-microagulhas, tesouras de mola e afastadores.
Depois de sacrificar um camundongo C57 Black 6 adulto, coloque-o em posição de decúbito dorsal em uma bandeja, prenda seus membros com fita adesiva e execute a toracotomia. Exponha o coração removendo qualquer excesso de tecido adiposo e fáscia, remova o átrio direito e perfunda o ventrículo esquerdo com solução salina em temperatura ambiente.
Remova todo o coração cortando a veia cava superior, a veia cava inferior, a artéria pulmonar e a aorta e corte aproximadamente 2 milímetros acima da junção ventrículo-arterial, que servirá como conduto para a pressurização.
Remova os ventrículos esquerdo e direito para expor as câmaras à pressão atmosférica, garantindo que a estrutura do tronco pulmonar não seja afetada pela remoção dos ventrículos. Tubo de pressurização anastomosa com a artéria pulmonar, deixando aproximadamente 1 milímetro de distância entre a junção sinotubular e a extremidade do tubo, para acomodar grandes movimentos dos folhetos e do tronco pulmonar.
Eleve o reservatório a uma pressão fisiológica análoga e encha-o com a solução salina. Teste o sistema de fluxo contínuo para garantir que não haja bloqueios ou bolhas de ar. Conecte uma torneira à válvula pulmonar anastomosada, Uma vez que o fluxo seja suficiente, comute o fluxo de saída para a valva pulmonar anastomosada e garanta a pressurização do tronco pulmonar, identificado pela distensão do tronco.
Após confirmar a pressurização do tronco pulmonar, incorporar gradualmente a solução fixadora primária, até que 25% da capacidade do reservatório da solução salina seja purgada. Coloque uma gaze embebida em fixador sobre a amostra de tecido para evitar o ressecamento. Perfunda o fixador por 3 horas, reabastecendo o reservatório para manter uma pressão constante.
Após a perfusão, armazene a válvula cardíaca na solução fixadora a 4 graus Celsius até o uso, por até 1 semana.