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Para começar, prepare um camundongo anestesiado em decúbito ventral. Posicione uma almofada cirúrgica personalizada sob o abdômen para elevar a coluna lombar e facilitar o acesso ao local. Em seguida, identifique a coluna lombar por meio dos processos espinhosos subcutâneos apontando para fora ou projeções ósseas na parte posterior de cada vértebra.
Faça uma incisão na pele da linha média do meio do tórax até a região lombar para expor a fáscia subjacente ou a camada de tecido conjuntivo. Localize a terceira vértebra da coluna lombar ou L3, presente no meio da coluna lombar, por seu processo espinhoso em forma de cunha. Além disso, identifique o L4 e o L5, respectivamente. Separe os músculos paravertebrais posteriores das vértebras L3-L5 para expor seus processos espinhosos e ligamentos.
Os ligamentos dos processos espinhosos consistem em ligamentos interespinhosos - bandas finas e membranosas que interconectam os processos espinhosos das vértebras vizinhas e ligamentos supraespinhosos - cordões fibrosos densos que ligam os ápices dos processos espinhosos das vértebras adjacentes. Juntos, esses ligamentos estabilizam a coluna vertebral.
Agora, remova os ligamentos interespinhosos das vértebras L3-L5 para separar os processos espinhosos individuais. Ressecção os processos espinhosos L3-L5 junto com seus ligamentos supraespinhosos. Feche a incisão cirúrgica sem recolocar os músculos paravertebrais. Retorne o mouse para sua gaiola. A ressecção de todos os processos espinhosos L3-L5 com ligamentos e descolamento dos músculos paravertebrais causam instabilidade da coluna lombar no camundongo.
Depois de confirmar a falta de resposta ao reflexo fetal, coloque um camundongo C57 Black 6 macho de oito semanas anestesiado em uma almofada cirúrgica em decúbito dorsal e aplique pomada nos olhos do animal. Use um aparador de pequenos animais para raspar a área cirúrgica da região torácica inferior até o topo da região sacral e remova o pelo raspado com lenços umedecidos.
Aplique o creme depilatório na área depilada, usando gaze para remover o creme, após no máximo três minutos e lave a pele exposta com 2 mililitros de solução salina estéril a 0,9%. Em seguida, coloque uma almofada cilíndrica cirúrgica feita sob o abdômen para levantar a coluna lombar.
Para expor as vértebras L3 e L5, use o dedo indicador para tocar os processos espinhosos subcutâneos das vértebras lombares e palpe para comparar os processos com os das vértebras torácicas e sacrais, para identificar a região lombar.
Enxágue a pele com álcool 75% e, usando um microscópio de dissecação, use um bisturi para fazer uma incisão na linha média da pele de 3 a 4 centímetros sobre a região lombar, da região torácica média até o quadril. Identifique a coluna lombar pela forma em V da fáscia posterior inserida nas pontas dos processos espinhosos e use o bisturi para fazer incisões rasas do músculo paraespinhoso posterior, ao longo dos processos espinhosos, de L3 a L5 lateralmente em ambos os lados da coluna. Em seguida, use dois pares de pinças oftálmicas para separar as camadas musculares, para expor os processos espinhosos de L3 a L5 e os ligamentos supraespinhosos.
Para separar processos espinhosos individuais, use tesouras de Vênus para cortar os ligamentos intraespinhosos e ressecar os processos espinhosos L3 a L5 e os ligamentos intraespinhosos. Em seguida, use suturas trançadas de seda estéreis número 5 para fechar a incisão na pele sem recolocar os músculos paravertebrais e aplique pomada de cloridrato de tetraciclina no local da cirurgia.