0 visualizações • 2:48 min. • July 8th, 2025
Biópsias guiadas por colonoscopia em modelos murinos induzem locais de feridas no cólon. Esses leitos de feridas são isolados para estudos moleculares e histológicos para entender o processo de cicatrização de feridas em doenças inflamatórias do trato gastrointestinal ou gastrointestinal.
Para iniciar o isolamento do leito da ferida, coloque um camundongo experimental sacrificado com uma ferida induzida por colonoscopia na posição supina. Incisar a pele abdominal e os músculos subjacentes para expor a cavidade corporal.
Coloque uma tesoura fechada sob o cólon e levante-a. Corte o cólon no meio e no ânus para separá-lo do corpo. Lave o cólon com um tampão apropriado para remover o conteúdo fecal.
Coloque os dois pontos em papel de filtro e corte-o longitudinalmente, com o lado mesentérico voltado para baixo no papel de filtro. Agora, adicione corante azul de metileno sobre o cólon e observe ao microscópio.
O corante mancha o tecido morto e granulado no leito da ferida, fazendo com que pareça mais escuro do que o tecido saudável circundante, permitindo sua fácil identificação. Preservar o leito isolado da ferida para estudos de expressão gênica.
No ponto final experimental apropriado, abra as camadas da pele e dos músculos abdominais para expor a cavidade corporal do animal experimental e coloque uma pinça fechada sob o cólon. Levante suavemente o cólon para liberá-lo do mesentério subjacente e corte o tecido em seu ponto médio e no ânus para coletá-lo do camundongo.
Use uma seringa de 20 mililitros cheia de PBS gelada e equipada com uma agulha de gavagem de rato para lavar o conteúdo fecal; e coloque o cólon limpo em um pedaço de papel de filtro. Abra o cólon longitudinalmente, tomando cuidado para que o lado mesentérico fique voltado para baixo contra o papel de filtro, e use uma pipeta Pasteur para cobrir a mucosa com azul de metileno a 0,2%.
Após alguns segundos, drene o excesso de mancha e visualize o cólon sob um microscópio de dissecação para localizar o leito da ferida. Use uma tesoura de microíris de 4 polegadas para cortar ao redor da borda da cama, tomando cuidado para não cortar a camada muscular, e use uma pinça de ponta fina para transferir o tecido dissecado para um tubo para congelamento e/ou armazenamento.