Isolamento de miofibras: uma técnica para obter miofibras únicas do músculo extensor longo dos dedos (EDL) de camundongo colhido

Comece com um camundongo sacrificado em decúbito dorsal. Esterilize seu membro posterior. Remova cirurgicamente a pele e a fáscia - um invólucro fino de tecido conjuntivo sob a pele - para expor os músculos subjacentes dos membros posteriores.

Localize o músculo tibial anterior ou TA na lateral da tíbia. Segurando o tendão distal do TA, descole o músculo do tecido subjacente. Corte o músculo próximo ao joelho para extirpar o músculo TA, revelando o extensor longo dos dedos subjacente ou o músculo EDL localizado no compartimento anterior do membro posterior.

Incise o tendão distal do EDL e puxe o músculo EDL em direção ao joelho. Corte o tendão proximal do EDL para extirpar o músculo EDL. Transfira o músculo colhido para um tubo com meio pré-aquecido contendo enzimas colagenase e incube pelo tempo apropriado. As colagenases quebram o tecido conjuntivo ao redor de cada fibra muscular ou miofibra dentro do músculo. Esta etapa de digestão solta as miofibras da camada interna do músculo.

Após a incubação, transfira cuidadosamente o músculo digerido para uma placa de vários poços contendo meios pré-aquecidos para aumentar a taxa de sobrevivência das miofibras. Transfira a placa para o es