0 visualizações • 3:53 min. • July 8th, 2025
Comece com um camundongo sacrificado em decúbito dorsal. Esterilize seu membro posterior. Remova cirurgicamente a pele e a fáscia - um invólucro fino de tecido conjuntivo sob a pele - para expor os músculos subjacentes dos membros posteriores.
Localize o músculo tibial anterior ou TA na lateral da tíbia. Segurando o tendão distal do TA, descole o músculo do tecido subjacente. Corte o músculo próximo ao joelho para extirpar o músculo TA, revelando o extensor longo dos dedos subjacente ou o músculo EDL localizado no compartimento anterior do membro posterior.
Incise o tendão distal do EDL e puxe o músculo EDL em direção ao joelho. Corte o tendão proximal do EDL para extirpar o músculo EDL. Transfira o músculo colhido para um tubo com meio pré-aquecido contendo enzimas colagenase e incube pelo tempo apropriado. As colagenases quebram o tecido conjuntivo ao redor de cada fibra muscular ou miofibra dentro do músculo. Esta etapa de digestão solta as miofibras da camada interna do músculo.
Após a incubação, transfira cuidadosamente o músculo digerido para uma placa de vários poços contendo meios pré-aquecidos para aumentar a taxa de sobrevivência das miofibras. Transfira a placa para o estágio aquecido de um microscópio estéreo. Agora, triture suavemente o músculo digerido para dissociar e liberar as miofibras individuais na solução.
As miofibras EDL isoladas podem ser usadas para análises posteriores a jusante.
Pulverize todos os equipamentos e os membros posteriores do camundongo com etanol a 70%. Use tesouras endurecidas e finas e pinças finas para remover a pele e expor os músculos subjacentes. Remova a fáscia circundante com a pinça de curva fina sem danificar os músculos subjacentes.
Para remover o tibial anterior ou TA, pegue o tendão distal do TA com uma pinça e corte-o com uma tesoura fina. Enquanto segura o TA no tendão, puxe-o em direção ao joelho e corte o músculo próximo ao joelho para expor o músculo EDL.
Levante o tendão distal do EDL com uma pinça curva e corte com uma tesoura de mola Vannas fina. Exponha o tendão proximal do EDL puxando cuidadosamente o EDL em direção ao joelho. Em seguida, corte o tendão proximal com uma tesoura. Incube os músculos EDL no tubo de reação a 37 graus Celsius em banho-maria circulante. Pare a digestão quando os músculos se soltarem e as miofibras individuais forem visíveis.
Trabalhando sob um microscópio binocular estéreo, equipado com uma placa de aquecimento, lave os músculos com meio de isolamento quente, usando a pipeta de grande calibre. Dissocie os músculos com a pipeta de grande calibre, até que o número desejado de miofibras esteja flutuando livremente na solução.