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A endoftalmite bacteriana é uma infecção ocular inflamatória devido à invasão intraocular da bactéria Bacillus cereus.
Para gerar endoftalmite bacteriana em um modelo de camundongo, coloque um camundongo anestesiado lateralmente na placa de cirurgia. Prenda a pele periocular para deslocar o globo ocular e localizar a região do limbo - um ponto de interseção da esclera e da córnea no olho.
Pegue uma agulha pré-cheia com a suspensão de cultura de Bacillus cereus. Insira a agulha no limbo e perfure a região vítrea média. Em seguida, injete a suspensão bacteriana por via intravítrea, liberando as bactérias na cavidade vítrea do olho.
Agora, remova a agulha e permita que o globo ocular recupere sua posição natural. Transfira o mouse para uma gaiola e monitore a propagação da infecção bacteriana. Uma vez lá dentro, as bactérias se replicam rapidamente para aumentar em número. Posteriormente, essas bactérias usam seus flagelos para migrar em direção à retina.
Ao atingir o espaço vítreo-retiniano, as bactérias secretam toxinas e enzimas, que as ajudam a invadir a retina. Dentro da retina, as proteínas do envelope bacteriano ativam as células de muller da retina, produzindo mediadores inflamatórios para recrutar células inflamatórias que danificam as delicadas células da retina. Eventualmente, um influxo de células inflamatórias no interior do olho causa endoftalmite no olho do camundongo.
Para injeção intravítrea, ligue o microinjetor e abra a válvula de gás no tanque de ar comprimido conectado ao microinjetor. Pressione 'Mode' no injetor até que a tela mostre 'Balance'. Pressione 'Balance' e coloque o mouse do computador na mesa de operação. Conecte o porta-pipetas de aço inoxidável ao tubo conectado ao 'Enchimento/Saída' no injetor e aperte firmemente o conector do porta-pipetas em torno de uma agulha de ponta de pipeta capilar de vidro chanfrado para permitir a inserção da agulha capilar na outra extremidade do porta-pipeta.
Ligue o microscópio oftálmico e defina a intensidade da luz para 50%. Posicione o microscópio sobre o lado do procedimento e ajuste o microscópio para o foco desejado. Depois de confirmar a falta de resposta ao refluxo do pé, coloque o mouse anestesiado do lado esquerdo nas almofadas médicas com o nariz apontado para a direita.
Localize o olho direito através da objetiva do microscópio oftálmico e coloque as pinças de uma pinça de ação reversa em ambos os lados do olho para expor o local da injeção. Clique com o botão esquerdo do mouse conectado ao microinjetor para encher a agulha capilar preparada com a solução bacteriana diluída e, prendendo a cabeça com a mão esquerda, coloque a ponta da agulha, com o lado chanfrado para cima, no limbo do olho.
Com a agulha em um ângulo de 45 graus, perfure o olho, tomando cuidado para que apenas 0,5 milímetros da ponta afiada da agulha sejam inseridos. Uma vez inserida a ponta da agulha, use a mão esquerda para clicar com o botão direito no mouse pad para injetar 0,5 microlitros da solução de B. cereus. Para evitar vazamentos, deixe a ponta da agulha dentro do olho do mouse por 2 a 3 segundos antes de removê-la. Em seguida, solte a pinça e o olho voltará para a órbita sozinho. Transfira o mouse para uma gaiola de recuperação em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a decúbito total.