Isolando células IPE e RPE: uma técnica para obter células epiteliais pigmentares oculares do olho de coelho

As células epiteliais pigmentares são células cuboidais terminalmente diferenciadas conectadas por junções apertadas. Essas células epiteliais que revestem a íris são as células epiteliais pigmentares da íris ou IPE, e aquelas próximas à retina são as células epiteliais pigmentares da retina ou RPE.

Para extrair essas células, pegue um olho de coelho intacto. Trate o olho com um desinfetante para remover quaisquer microorganismos da superfície do olho. Lave o desinfetante com uma solução tampão. Faça uma incisão perto da íris. Usando essa abertura, faça um corte circular completo ao longo do limite da íris, dividindo o olho em um segmento anterior contendo íris e uma parte posterior compreendendo retina e humor vítreo.

Pegue o segmento anterior e descarte a lente para acessar a íris. Retire a íris e coloque-a em um prato de cultura. Em seguida, pegue o segmento posterior e descarte o humor vítreo gelatinoso e a retina do bulbo ocular.

Trate a íris e o bulbo ocular com tripsina e incuba. A tripsina degrada a junção apertada e as proteínas da matriz extracelular, iniciando a dissociação das células epiteliais. Rejeitar a tripsina e adicionar um meio de cultura adequado. Raspe suaveme