JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 2:57 min • July 8th, 2025
O olho suíno contém uma população de células epiteliais cuboidais que contêm numerosos melanossomos - organelas que ajudam na absorção de luz - resultando na aparência pigmentada dessas células. Dependendo da localização dessas células, as células epiteliais presentes abaixo da retina são chamadas de células epiteliais pigmentares da retina, ou células RPE, e as que revestem a íris são conhecidas como células epiteliais pigmentares da íris, ou células IPE.
Para isolar as células RPE e IPE, comece pegando um olho suíno. Mergulhe o olho em uma solução desinfetante adequada para remover quaisquer micróbios presos à superfície do olho.
Remova o olho da solução desinfetante e use uma agulha para fazer uma pequena incisão perto da íris. Use esta abertura para fazer um corte circunferencial completo ao longo do limite da íris. Isso separa o segmento anterior do olho contendo íris do bulbo ocular posterior, que possui a retina. Remova a porção em excesso e transfira a íris e o bulbo ocular para placas de cultura separadas.
Adicione um meio de cultura adequado na placa contendo íris e no bulbo ocular. Raspe o lenço de papel. A força mecânica solta as células epiteliais, liberando-as no meio. Aspirar as células EPI e EPR destacadas. Semeie-os em placas de cultura separadas e incube até o uso posterior.
Limpe o tecido muscular e a pele restantes dos olhos, desinfete os olhos em solução à base de iodo e enxágue-os com PBS.
Para isolar as células IPE, remova a lente e retire a íris, conforme demonstrado. Depois de preparar duas íris, adicione 1 mililitro de meio completo e isole as células riscando com uma pipeta Pasteur polida a fogo, depois conte e semeie as células. Coloque a placa na incubadora.
Para isolar as células do EPR, remova o vítreo e a retina do segmento posterior e coloque o bulbo em uma placa de Petri. Encha o bulbo com 1 mililitro de meio completo. Usando uma pipeta Pasteur curvada polida a fogo, remova as células RPE, colete a suspensão celular dentro do bulbo usando uma pipeta de 1.000 microlitros e transfira-a para um tubo de 1,5 mililitro para ressuspensão. Em seguida, conte e semeie as células e incube a placa conforme demonstrado anteriormente.