JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 3:17 min • July 8th, 2025
A porção anterior do olho é coberta pela córnea - uma camada transparente que permite a transmissão dos raios de luz. A córnea se estende até a esclera - um tecido protetor branco ao redor do olho. A parte do olho que consiste na córnea cercada por um anel fino da esclera é o botão corneoescleral.
Para extirpar o botão corneoescleral, coloque um olho suíno intacto em uma placa de Petri. Remova a conjuntiva - uma cobertura mucilaginosa ao redor da esclera - junto com os músculos extraoculares circundantes para acessar a cobertura escleral. Trate o olho com uma solução desinfetante adequada para remover quaisquer microrganismos contaminantes da superfície do olho.
Lave o desinfetante com uma solução tampão. Transfira o olho desinfetado para um prato de cultura fresco. Faça uma incisão na esclera perto do limite da córnea. Usando esta abertura, faça um corte circunferencial completo para dividir o olho em dois fragmentos.
Visualize o lado interno do segmento frontal para localizar o revestimento uveal preso à esclera. Este tecido consiste em íris pigmentada, um corpo ciliar em forma de anel e uma porção da camada coróide vascular. Separe a úvea para visualizar a camada corneoescleral. Armazenar o botão numa solução tampão estéril para ensaios posteriores.
Use uma pinça estéril para transferir o globo ocular para uma placa de Petri. Remova a conjuntiva e o tecido muscular ao redor do globo ocular usando uma lâmina de bisturi # 15 e uma pinça. Em seguida, enquanto segura o nervo óptico com a pinça, levante suavemente o globo ocular e transfira-o para um frasco de meio litro cheio de PBS estéril.
Depois que todos os globos oculares estiverem limpos do tecido circundante, use uma pinça estéril para movê-los para outro frasco de meio litro cheio de iodopovidona a 3% em PBS. Depois que os globos oculares estiverem no frasco por um minuto, transfira-os para um terceiro frasco contendo PBS estéril.
Coloque um globo ocular em uma placa de Petri limpa e use a pinça para mantê-la firme. Com uma lâmina de bisturi # 10A, faça um corte próximo à córnea. Use uma tesoura para extirpar a córnea, deixando cerca de 3 milímetros de esclera ao seu redor. Certifique-se de que a ponta afiada da tesoura esteja no espaço supracoroidal e não perfure a íris.
Segure o botão corneoescleral com uma pinça e use outro par de pinças pontiagudas para separar suavemente o tecido uveal. Em seguida, levante o botão corneoescleral para separá-lo do restante do globo ocular. Enxágue brevemente o botão em uma solução de iodopovidona a 1,5% em PBS. Em seguida, coloque o botão em PBS estéril em uma placa de 12 poços.