Geração de fatias ventriculares suínas: uma técnica baseada em vibratoma para preparar fatias ultrafinas de tecido cardíaco de porco

Fatias de tecido cardíaco de mamíferos - fatias ultrafinas de tecido cardíaco viável do ventrículo de mamíferos - retêm a arquitetura e a fisiologia do tecido cardíaco, tornando-as sistemas modelo para pesquisa cardiovascular translacional.

Para gerar fatias de tecido cardíaco suíno, coloque um coração suíno recém-colhido em uma bandeja contendo solução cardioplégica resfriada, que interrompe temporariamente a atividade cardíaca, protegendo o coração. Disseque o coração para isolar o ventrículo esquerdo, seguido de cortá-lo em blocos de tecido de tamanho uniforme. Usando cola de tecido, prenda o bloco de tecido ao bloco de ágar pré-fabricado fixado à base do suporte da amostra do vibratomo, com o epicárdio cardíaco - a camada externa do coração - voltado para baixo.

Transfira o suporte da amostra para a bandeja de fatiamento de vibratomo resfriada, oxigenada e preenchida com tampão para manter as condições fisiológicas do tecido e resfrie-o durante o corte. Ajuste a altura da lâmina do vibratomo e os parâmetros de corte com base na espessura desejada da seção do tecido. Durante a corrida, a lâmina vibratória avança e penetra no bloco de tecido.

O ágar fornece estabilidade ao bloco de tecido durante o corte e mantém a lâmina em um caminho, gerando fatias de tecido cardíaco intactas uniformes com fibras miocárdicas alinhadas. Colete e transfira as fatias de tecido para um banho tampão oxigenado para reduzir os danos aos tecidos. As fatias de tecido cardíaco estão prontas para análise a jusante.

Para obter fatias de tecido de coração de porco, primeiro adicione gelo à camisa de resfriamento do banho de tecido de um vibratomo e adicione a solução de Tyrode ao banho. Use uma jarra de plástico de 1 litro para coletar o escoamento de gelo derretido da camisa de resfriamento do banho de lenços de papel e transfira os corações de porco para uma bandeja contendo 1 litro de solução cardioplégica fresca e fria em um armário de biossegurança.

Use bisturis estéreis retráteis para dissecar o coração para isolar o ventrículo esquerdo e use lâminas de barbear retangulares para cortar o ventrículo esquerdo em blocos de 1 a 2 centímetros cúbicos. Separe um bloco de tecido para fatiar e coloque os pedaços restantes do bloco de tecido em um tubo de 50 mililitros de solução fria de Tyrode no gelo.

Massageie suavemente o bloco de tecido reservado e adicione 1 a 2 gotas de cola de tecido ao suporte de amostra de metal do vibratome. Cole um pedaço de bloco de ágar 4% com uma área de superfície de aproximadamente 1 centímetro quadrado na cola e adicione 1 a 2 gotas de cola de tecido ao ágar.

Prenda o bloco cardíaco ao ágar, com o lado do epicárdio cardíaco voltado para baixo, com o tecido o mais plano possível contra o suporte, e coloque o suporte de tecido com o bloco cardíaco no banho de corte do vibratome.

É crucial colar o bloco cardíaco no ágar com o lado do epicárdio cardíaco voltado para baixo na cola do tecido e garantir que o tecido seja o mais plano possível.

Em seguida, conecte o tubo de oxigênio ao banho de corte e à bandeja de metal cheia com a solução de Tyrode e coloque filtros de células de 40 micrômetros na bandeja de metal para coletar as seções de tecido cardíaco à medida que são cortadas. Use o software de operação do vibratome para ajustar a altura da lâmina e da amostra, de modo que a lâmina fique perto do topo do tecido, mas abaixo dos músculos papilares, e o líquido cubra o tecido e a lâmina.

Selecione Avançar para ajustar onde começar a cortar o tecido. Pressione Slice para aumentar a velocidade e use o botão para mover a lâmina em direção à borda do tecido. Pressione Fatiar novamente para parar e Avançar para desativar o processo. Em seguida, ajuste os parâmetros de corte conforme indicado e pressione Fatiar para começar a fatiar o tecido. Quando a lâmina atingir o final do tecido, mas antes de atingir o final do suporte da amostra, pressione Fatiar novamente para parar e pressione Return para voltar à posição inicial.

Quando as fatias atingirem o comprimento total e parecerem de boa qualidade, use uma pipeta de plástico Pasteur cheia de solução fria de Tyrode para coletar suavemente o tecido do banho, usando uma pinça e uma tesoura de mola para deslocar a fatia do coração, conforme necessário. Coloque cada fatia coletada em um filtro de célula única no banho de Tyrode oxigenado e use a solução na pipeta para pressionar o tecido na superfície do filtro de células.