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Biologia
0 vistas • 3:02 min • July 8th, 2025
O oócito suíno é cercado por um aglomerado compacto de várias camadas de células cumulus formando o complexo cumulus-oócito ou COC. As células do cumulus mais internas estendem os processos através da zona pelúcida do oócito. Esses processos desenvolvem junções comunicantes e intermediárias, que ajudam na transferência intercelular de moléculas entre o oócito e as células do cumulus circundantes. Essas interações bidirecionais mantêm a viabilidade dos COCs, que é um determinante crucial para o sucesso da fertilização in vitro ou fertilização in vitro.
Para isolar os COCs, mergulhe alguns folículos ovarianos suínos em uma placa de Petri contendo o meio de maturação. Este meio contém hormônios necessários para a maturação in vitro do oócito. Disseque os folículos ovarianos para liberar COCs e fluido folicular na placa de Petri. Este fluido complementa o meio de maturação com nutrientes e hormônios adicionais essenciais para a competência do oócito.
Aspire o conteúdo folicular liberado e transfira-o para outra placa de Petri. Visualize a placa ao microscópio para identificar COCs não danificados que exibem morfologia normal consistindo de oócitos redondos com citoplasma moderadamente granulado e um corpo polar intacto cercado por células do cumulus.
Isole um único COC e transfira-o para o poço central contendo o meio de maturação de uma placa de fertilização in vitro. Armazene a placa em uma temperatura ideal até o uso posterior.
Para isolar os COCs de folículos de tamanho médio, transfira dois a três ovários para uma placa de Petri estéril de 10 cm cheia de HM. Corte suavemente a superfície dos folículos ovarianos salientes com uma lâmina cirúrgica estéril # 15, o que fará com que o fluido folicular e os COCs fluam para a placa de Petri. Aspire o conteúdo folicular com uma agulha de calibre 28 acoplada a uma seringa descartável e transfira-o para outra placa de Petri.
Para preparar as placas de Petri de fertilização in vitro, adicione 1 mililitro de HM aos poços centrais e coloque três a quatro gotas de HM nos anéis externos. Em seguida, use uma micropipeta de policarbonato para mover os COCs não danificados para gotas de HM nos anéis externos e enxágue-os brevemente três a quatro vezes. Quando terminar, transfira-os individualmente para o poço central. Armazene as placas de fertilização in vitro na incubadora.
Este artigo demonstra um protocolo detalhado para o isolamento de complexos cumulus-oócito (COCs) de ovários suínos. Os COCs isolados são essenciais para estudos de fertilização in vitro (FIV) e tratamentos de fertilidade, pois mantêm a viabilidade e a competência desenvolvimental dos oócitos.
O isolamento confiável de complexos cumulus-óvulo (COCs) suínos é fundamental para pesquisas em biologia reprodutiva e fertilidade em estágios iniciais, permitindo estudos controlados de fertilização in vitro (FIV). Esta técnica proporciona confiança preditiva na viabilidade do óvulo e na competência de desenvolvimento, impactando diretamente o desenvolvimento de ensaios e a fidelidade de modelos translacionais. A preparação padronizada de COCs é essencial para fluxos de trabalho escaláveis e reproduzíveis em processos de tecnologia reprodutiva.
Este protocolo de isolamento de COC se situa na interface entre a descoberta inicial e o desenvolvimento de ensaios, fornecendo material fundamental para estudos de FIV, maturação e competência desenvolvimental.
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Última atualização: 22 agosto 2026