JoVE Encyclopedia of Experiments
Biologia
0 vistas • 3:29 min • July 8th, 2025
Prepare uma camada de pó de etileno propileno fluorado, ou FEP, em uma placa de cultura. Adicione uma gota de meio de maturação contendo complexos cumulus-oócitos, ou COCs, ao pó de FEP. Role suavemente a gota sobre o pó para formar uma bola de gude líquida, ou LM. O pó FEP cria uma casca porosa hidrofóbica, permitindo a troca gasosa entre o líquido interior e o ambiente circundante.
Agora, colete a unidade LM e transfira-a para o poço central de uma placa de Petri de fertilização in vitro. Adicione água estéril ao anel externo para manter os AOCs hidratados. Em seguida, incubar o LM em condições fisiológicas para permitir a maturação do oócito.
Em seguida, remova o meio gasto e adicione um meio de maturação fresco. O contato direto com o líquido interrompe o invólucro hidrofóbico do FEP e quebra o LM para liberar os COCs. Transferir os COCs libertados para uma nova placa contendo uma gota fresca de meio de maturação e lavá-los para remover as partículas de FEP.
Após a lavagem, transferir os COCs e o meio fresco para o leito de pó FEP. Role a gota para cobri-la com pó. Finalmente, transfira o LM para a placa de Petri de fertilização in vitro. As LMs revestidas a pó FEP mantêm a estrutura 3D dos oócitos e aumentam sua viabilidade.
Faça uma cama de 5 gramas de pó FEP em uma placa de Petri de 30 milímetros. Distribuir uma única gota de meio de maturação, contendo 3 a 5 COCs, sobre o pó FEP. Gire a placa suavemente em movimentos circulares para garantir que as partículas cubram completamente a superfície da gota de líquido e formem bolinhas de gude líquidas ou LMs.
Prepare várias placas de Petri de fertilização in vitro de 60 milímetros e adicione 3 a 4 mililitros de água estéril aos anéis externos para criar uma câmara de umidade. Pegue o LM formado com uma pipeta de 1.000 microlitros e coloque-o no poço central. Incube as bolinhas de gude por quatro dias a 38 graus Celsius em uma incubadora de 5% de dióxido de carbono.
Para trocar o meio, aplique 30 microlitros de meio de maturação em cada LM, o que fará com que ele se espalhe. Quando o conteúdo do mármore se dissolver, transfira os COCs liberados do biorreator para uma gota de meio de maturação fresco na placa de Petri. Após 3 a 4 lavagens em meio de maturação, transfira os COCs junto com 30 microlitros de meio fresco, para o leito de pó FEP.
Gire suavemente a placa em movimentos circulares para garantir que as partículas de pó cubram completamente a superfície da gota de líquido e formem um novo LM. Em seguida, transfira o LM para a placa de Petri de fertilização in vitro.