Vitrificação de embriões de coelho usando palha criogênica: uma técnica de resfriamento ultrarrápido para preservar embriões de coelho para armazenamento a longo prazo

0 vistas3:15 min • July 8th, 2025

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A vitrificação de embriões é uma técnica de criopreservação ultrarrápida que resfria os embriões a taxas extremamente rápidas a temperaturas ultrabaixas, facilitando seu armazenamento a longo prazo.

Para começar, pegue os embriões de coelho colhidos em meios adequados. Incubar os embriões com solução de equilíbrio contendo baixas concentrações de crioprotetores que permeiam as células - etilenoglicol, ou EG, e dimetilsulfóxido, ou DMSO. EG e DMSO se difundem através das membranas celulares, substituindo as moléculas de água dentro das células e impedindo a formação de cristais de gelo intracelulares.

Em seguida, incubar os embriões com solução de vitrificação contendo concentrações mais altas de EG e DMSO para permitir a permeação adequada dos crioprotetores e efluxo de água intracelular suficiente, protegendo as células dos danos causados pelo congelamento.

Acople um transportador de canudo criogênico estéril a um microdispensador. Usando o microdispensador, encha o canudo com o meio desejado até o nível apropriado. Em seguida, aspire uma bolha de ar, seguida por um volume mínimo de solução de vitrificação contendo embriões e outra bolha de ar.

Aspire o meio novamente até que a primeira fração do meio molhe e polimerize o tampão de algodão revestido a pó, selando a extremidade do canudo. Feche a outra extremidade com um tampão de palha hidrofóbico. Os segmentos de ar e meio ajudam a isolar os embriões dentro do transportador fechado.

Mergulhe brevemente o canudo em nitrogênio líquido a -196 ° C. O transportador garante altas taxas de resfriamento, solidificando os embriões em uma fase amorfa semelhante ao vidro, enquanto o baixo volume de solução de vitrificação e crioprotetores usados mitigam o estresse osmótico. Os embriões vitrificados, com atividade metabólica suspensa, podem ser armazenados até o uso.

Para vitrificação embrionária, mergulhe os embriões em solução equilibrante por 2 minutos, seguido de uma incubação de 1 minuto em solução de vitrificação. No final da incubação, carregue os embriões em uma ministra plástica de 125 microlitros e acople a extremidade fechada do canudo com um microdispensador apropriado de 1 mililitro. Aspire o meio de base até um terço do comprimento do canudo, seguido por uma pequena bolha de ar.

Em seguida, use um estereomicroscópio para aspirar os embriões em 40 microlitros de solução de vitrificação, seguido por outra pequena bolha de ar em meio de base suficiente para mover a primeira fração líquida até a extremidade do algodão da ministra. Em seguida, feche a extremidade aberta do ministério com um tampão de palha, mergulhe o ministério diretamente no nitrogênio líquido para obter a vitrificação e armazene o ministério em um dewar de nitrogênio líquido.

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Última atualização: 15 agosto 2026