0 visualizações • 2:31 min. • July 8th, 2025
O descongelamento de embriões é um processo no qual embriões congelados criopreservados são aquecidos e reidratados, restaurando sua atividade biológica.
Para descongelar embriões de coelho criopreservados em um canudo criogênico selado, remova o canudo do nitrogênio líquido. Os embriões, com volume mínimo de meio contendo crioprotetor, são fisicamente isolados por segmentos de ar e meio dentro da palha. Posicione brevemente o canudo no ar, facilitando a liberação de vapores de nitrogênio líquido presos, que causam danos ao embrião durante a exposição a temperaturas mais quentes.
O rápido aumento das temperaturas de nitrogênio líquido criogênico para temperaturas de congelamento mais altas inicia a formação de cristais de gelo dentro do canudo criogênico, arriscando danos ao embrião. À medida que os cristais de gelo começarem a se formar, mergulhe imediatamente o canudo em um banho-maria com temperatura controlada com agitação suave para um descongelamento uniforme. Esta etapa remove os cristais de gelo, protegendo os embriões dos danos causados pelos cristais de gelo.
Remova o plugue do canudo. Corte a ponta selada do canudo; Conecte um microdispensador para liberar o conteúdo em uma placa de cultura com meio contendo sacarose. O meio ajuda a remover os crioprotetores dos embriões; A sacarose evita o inchaço excessivo dos embriões, restaurando seu ambiente fisiológico durante a reidratação.
Transfira os embriões para uma placa contendo meio fresco para remover completamente os crioprotetores, garantindo a reidratação completa. Os embriões descongelados estão prontos para procedimentos de transferência de embriões.
Para descongelar os embriões para uma transferência, coloque a ministra horizontalmente, a 10 centímetros do vapor de nitrogênio líquido por 20 a 30 segundos. Quando o processo de cristalização começar dentro da ministra, mergulhe o canudo em banho-maria a 25 graus Celsius por 10 a 15 segundos. Remova imediatamente os tampões de palha e algodão e use um microdispensador acoplado para expelir o conteúdo do ministério para uma placa contendo meio base a 25 graus Celsius suplementado com solução de sacarose molar 0,33 na qual os embriões devem permanecer por 5 minutos. Em seguida, transfira os embriões para um prato de meio de base fresco para outra incubação de 5 minutos.