Carregamento de esferas para introduzir ácidos nucléicos em células cultivadas aderentes: uma técnica para carregar plasmídeos codificadores de proteínas fluorescentes em células de mamíferos aderentes

Comece com uma cultura de células de mamíferos aderentes em uma placa de cultura. Transfira esferas de vidro esterilizadas tratadas com álcalis, do tamanho de mícrons, para a câmara de um aparelho carregador de esferas personalizado. Cubra a abertura da câmara usando uma malha com aberturas de tamanho ideal para permitir que os cordões passem durante o carregamento. Prenda a malha com um conjunto de câmara de imagem.

Remova a mídia da placa. Pipete uma suspensão de DNA plasmidial codificador de proteína repórter fluorescente na placa para distribuição uniforme sobre as células. Usando o aparelho carregador de contas, disperse suavemente uma monocamada de contas de vidro nas células. Bata brevemente na placa de cultura com força adequada.

As contas de vidro rolam brevemente sobre as células aderentes, enquanto o tratamento alcalino as torna menos aderentes às células. O impacto das colisões entre grânulos e células transmite tensão adequada, criando rupturas localizadas nas membranas celulares. Esses poros transitórios formados de pequenas dimensões facilitam a absorção do DNA do plasmídeo nas células, evitando a entrada de grandes grânulos.

Durante o período de recuperação, a membr