Transformação genética mediada por agrobactérias: um método para transformar geneticamente o genoma do arroz por meio de Agrobacterium tumefaciens geneticamente modificado

Agrobacterium tumefaciens, uma bactéria patogênica de plantas, pode ser geneticamente modificada pela introdução de um plasmídeo Ti preparado artificialmente, carregando um gene de interesse em seu DNA de transferência ou região T-DNA, e um plasmídeo auxiliar carregando os genes de virulência ou Vir para transferir o T-DNA para células vegetais.

Para a transformação genética mediada por Agrobacterium, comece com uma inflorescência de arroz jovem e corte-a em pequenos pedaços. Transfira as estacas para um meio de crescimento e incube para facilitar o crescimento das estacas em uma massa celular indiferenciada chamada calo.

Agora, transfira o calo para um meio de infiltração de Agrobacterium contendo acetosiringona - um quimioatraente para Agrobacterium. Em seguida, adicione uma cultura de Agrobacterium geneticamente modificado ao meio e incube brevemente.

As moléculas de acetosiringona ativam a proteína receptora celular - VirA - na membrana de Agrobacterium, que medeia ainda mais a fosforilação de uma proteína ativadora transcricional - VirG. O VirG fosforilado se move em direção ao plasmídeo auxiliar e ativa a transcrição de uma cascata de genes de virulência, incluindo proteínas