Coloração Oil Red O: Uma Técnica para Coloração de Lipídios Neutros em Hepatócitos para Detecção de Esteatose Hepática In Vitro

A esteatose hepática é uma condição patológica caracterizada por um acúmulo excessivo de gorduras nos hepatócitos - um tipo de célula hepática proeminente. As gorduras se depositam na forma de gotículas lipídicas de tamanhos variados no citoplasma dos hepatócitos.

Estruturalmente, uma gotícula lipídica contém um núcleo de gorduras hidrofóbicas neutras, como triglicerídeos e ésteres de colesterol. O núcleo é circundado por uma monocamada de fosfolipídios decorada com várias proteínas.

Para visualizar a deposição de gordura, pegue uma placa de vários poços contendo uma cultura de hepatócitos aderente. As células são pré-tratadas com um meio esteatogênico para induzir o acúmulo de gotículas lipídicas dentro delas.

Adicione a concentração desejada de paraformaldeído, que se difunde nas células e reticula as proteínas. Esta etapa desativa as proteases e preserva a estrutura dos hepatócitos. Rejeitar o paraformaldeído e adicionar a solução de óleo-vermelho-O que contém o corante orgânico dissolvido em isopropanol.

O isopropanol atua como um solvente transportador para as moléculas de óleo-vermelho-O moderadamente solúveis. Isso ajuda as moléculas do corante a entrar nos hepatócitos fixos