Coloração de Von Kossa de células musculares lisas vasculares da aorta: uma técnica in vitro para avaliação da calcificação da camada medial arterial

As células musculares lisas vasculares, ou VSMCs, são os componentes celulares proeminentes na túnica média - a camada intermediária da parede do vaso sanguíneo. Em resposta a pistas patológicas ou envelhecimento, essas células medeiam a calcificação vascular - um fenômeno de acúmulo de cálcio na matriz extracelular.

Pegue uma placa de vários poços contendo uma camada aderente de cultura VSMC aórtica murina pré-calcificada. Incube as células com solução de formalina para reticular as proteínas celulares e estabilize a estrutura do VSMC antes da coloração.

Comece a coloração de von Kossa aspirando formalina do poço e adicionando solução de nitrato de prata. Incube a placa sob uma fonte de luz apropriada.

Uma vez que a solução de nitrato de prata atinge os locais de calcificação na matriz extracelular da camada VSMC, os íons de prata substituem os íons de cálcio ligados ao fosfato. Isso resulta em uma coloração amarela transitória. Na presença de matéria orgânica e luz, a degradação fotoquímica do fosfato de prata resulta na formação de prata metálica de cor preta.

Rejeitar a quantidade máxima de solução de nitrato de prata gasta. Trate as células com solução de tiossulfato de sódio.