Coloração negativa baseada em cápsula de amostras de vírus em grades TEM: uma técnica de coloração de metais pesados para visualizar a ultraestrutura de vírus envelopados

Para coloração negativa de vírus envelopados, comece com a suspensão viral desejada. Incube os vírus com glutaraldeído, um fixador químico. Após a penetração, o glutaraldeído reticula as proteínas virais e os ácidos nucléicos, inativando os vírus e preservando a morfologia, facilitando assim o manuseio seguro do vírus. Transfira esta mistura para uma placa de vários poços.

Conecte a microscopia eletrônica de transmissão, TEM, grades contendo cápsula a uma pipeta por meio de um acoplador. Usando a pipeta, aspire a mistura fixadora de vírus para dentro da cápsula. Incube o conjunto da pipeta para que os vírus sejam adsorvidos nas superfícies da grade.

Remova a mistura. Lave a cápsula, removendo vírus não aderentes e fixadores. Pipete uma solução de acetato de uranilo, um corante à base de metais pesados, para dentro da cápsula. Incube para permitir que a mancha entre em contato com os vírus.

Os íons uranila se ligam a glicoproteínas e fosfolipídios específicos da membrana nas superfícies virais. Os íons podem penetrar nos vírus e se ligar às proteínas do nucleocapsídeo que envolvem o genoma. Essa ligação induz a agregação e deposição de íons de metais pesados ao redor do vírus e estr